Migliori pratiche per le misurazioni degli acidi nucleici

• Isolare e purificare i campioni di acido nucleico prima della misurazione per rimuovere le impurità. A seconda del campione, le impurità potrebbero includere DNA, RNA, nucleotidi liberi, proteine, alcuni componenti del tampone e coloranti. Per ulteriori informazioni, vedere Preparazione dei campioni.

Nota I reagenti di estrazione come guanidina, fenolo ed EDTA contribuiscono all’assorbanza tra 230 nm e 280 nm e influiranno sui risultati delle misurazioni, se presenti nei campioni (anche in quantità minime).

• Assicurarsi che l’assorbanza del campione rientri nei limiti di rilevamento dell'assorbanza dello strumento.

• Eseguire il bianco utilizzando la stessa soluzione tampone usata per risospendere l’analita di interesse. La soluzione di bianco deve avere un pH e una forza ionica simili a quelli della soluzione dell’analita.

• Eseguire un ciclo con il bianco per valutare il contributo di assorbanza della soluzione tampone. Se il tampone mostra una forte assorbanza in corrispondenza o in prossimità della lunghezza d’onda dell’analisi (generalmente 260 nm), potrebbe essere necessario scegliere un tampone o un’applicazione diversi. Per ulteriori informazioni vedere Scelta e misurazione di un bianco.

• Per le misurazioni microvolumetriche:

–Assicurarsi che le superfici dei piedistalli siano adeguatamente pulite e condizionate.

–Se possibile, riscaldare i campioni ad alta concentrazione o a grandi molecole, come DNA genomico o lambda, a 63 °C e centrifugare delicatamente (ma accuratamente) prima di eseguire una misurazione. Evitare di introdurre bolle durante la miscelazione e il pipettaggio.

–Seguire le migliori pratiche per le misurazioni microvolumetriche.

–Utilizzare un volume di campione di 1-2 µL. Per ulteriori informazioni, vedere Volumi dei campioni raccomandati.

• Per le misurazioni in cuvetta (solo strumenti NanoDrop UltraC e NanoDrop UltraC FL), utilizzare cuvette compatibili e seguire le migliori pratiche per le misurazioni in cuvetta.

Argomenti correlati

• Misurazione di un campione microvolumetrico

• Misurazione di un campione utilizzando una cuvetta

• Migliori pratiche per le misurazioni microvolumetriche

• Migliori pratiche per le misurazioni in cuvetta

• Preparazione dei campioni e dei bianchi

• Operazioni di base dello strumento