Misurare campioni marcati con fluorofori

Utilizzare l’applicazione del fluorimetro per misurare la fluorescenza emessa da una gamma di campioni che sono stati marcati con fluoroforo. Questa applicazione funziona in modo simile alle applicazioni dsDNA Fluorescence e RNA Fluorescence, utilizzando una curva standard generata per determinare la concentrazione dei campioni misurati. Questa applicazione consente l’utilizzo di saggi aggiuntivi oltre a NanoDrop Ultra BR Fluorescence Assay.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.

AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

Preparazione dei campioni e degli standard

Per istruzioni sulla preparazione degli standard e dei campioni per il saggio, consultare le istruzioni che accompagnano il saggio che si sta utilizzando.

Vedere la sezione Utilizzo delle curve standard per maggiori informazioni sulle opzioni disponibili durante la creazione di una curva standard.

Misurare gli standard e i campioni marcati con fluorofori utilizzando la fluorescenza

1. Nella schermata iniziale, selezionare la scheda Fluorescence (Fluorescenza), quindi selezionare Fluorometer (Fluorimetro).

2. Selezionare una delle opzioni del LED di eccitazione (blu o rosso).

3. Configurare tutte le opzioni di configurazione desiderate e selezionare Save (Salva).

4. Misurare gli standard:

a.Pipettare 2 µL della provetta per saggio contenente il riferimento sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio. Il riferimento non deve contenere alcuno degli analiti di interesse.

•Se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) non è attivata , selezionare Measure (Misura) per avviare la misurazione.

•Se l’opzione di Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata , la misurazione inizierà automaticamente dopo aver abbassato il braccio.

Nota Utilizzare sempre un’aliquota fresca da 2 µL per ogni misurazione.

b.Al termine della misurazione, rimuovere il campione sia dal piedistallo superiore che da quello inferiore utilizzando una salvietta da laboratorio asciutta.

c.Se l’impostazione dei replicati è maggiore di 1, ripetere la misurazione fino al completamento di tutti i replicati.

–Ripetere i passaggi secondari precedenti per lo standard n. 1, comprese ulteriori misurazioni replicate di ciascuno.

–Una volta misurati tutti gli standard e tutti i replicati, verrà visualizzato un messaggio per proporre le seguenti opzioni: rimisurare gli standard o procedere con la misurazione dei campioni.

–Al termine della misurazione degli standard, selezionare Measure Samples (Misura i campioni).

5. Misurazione dei campioni:

a.Inserire o modificare l’ID del campione nella parte superiore dello schermo selezionando la casella e inserendo un nuovo nome per il campione.

b.Pipettare 2 µL della provetta contenente il campione corrispondente sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio.

•Se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) non è attivata , selezionare Measure (Misura) per avviare la misurazione.

•Se l’opzione di Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata , la misurazione inizierà automaticamente dopo aver abbassato il braccio.

Nota Utilizzare sempre un’aliquota fresca da 2 µL per ogni misurazione.

c.Al termine della misurazione del campione, vengono visualizzati la curva standard e i valori riportati (vedere la sezione successiva).

d.Al termine della misurazione, rimuovere il campione sia dal piedistallo superiore che da quello inferiore utilizzando una salvietta da laboratorio asciutta.

e.Ripetere i passaggi secondari per misurare tutti i campioni rimanenti (seguendo le istruzioni sullo schermo).

f.Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

6. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova.

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