Eseguire una misurazione con Protein BCA

Il saggio Protein BCA utilizza l’acido bicinconinico come reagente colorimetrico di rilevamento per determinare la concentrazione proteica totale in campioni proteici non purificati. Questa applicazione è utile per misurare soluzioni proteiche diluite o proteine in presenza di componenti che mostrano un’assorbanza significativa tra 200 nm e 280 nm, il che esclude la misurazione diretta delle proteine a 280 nm o 205 nm. Questa applicazione misura l’assorbanza a 562 nm e utilizza una curva standard per calcolare la concentrazione proteica. Viene applicata una correzione della linea di base a punto singolo.

AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.

Procedura

1. Nella schermata principale, selezionare la scheda Proteins (Proteine), quindi selezionare Protein BCA.

2. Configurare una qualsiasi delle opzioni di configurazione se lo si desidera e selezionare Save (Salva). (Specificare un tipo di curva e il numero di replicati per ogni standard, quindi inserire la concentrazione di ciascuno standard.)

Suggerimento: per questo saggio, raccomandiamo di impostare il tipo di curva su “Linear” (Lineare).

3. Se si utilizza il modello NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, selezionare il percorso di misurazione corretto.

–Se si utilizza una cuvetta, selezionare Cuvette (Cuvetta) dal menu a discesa nella parte superiore dello schermo; in questo modo verranno visualizzate le impostazioni della cuvetta. Selezionare la lunghezza del percorso, la velocità di agitazione e il riscaldamento desiderati, quindi chiudere il menu a discesa.

–Quando si utilizza il piedistallo per la misurazione, lasciare selezionata l’opzione Pedestal (Piedistallo) nella parte superiore dello schermo.

4. Misurazione del bianco:

–Pipettare 2 µL di DI H2O sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio, oppure inserire la cuvetta per il bianco con DI H2O nel portacuvette

Suggerimento: se si utilizza una cuvetta, assicurarsi di allineare il percorso ottico della cuvetta con il percorso ottico dello strumento.

–Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Blank (Bianco automatico) è attivata, la misurazione del bianco inizia automaticamente quando si abbassa il braccio. (Questa opzione non è disponibile per le misurazioni in cuvetta.)

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

5. Misurazione dello standard di riferimento:

–Pipettare 2 µL di soluzione di riferimento sul piedistallo o inserire la cuvetta di riferimento (la soluzione di riferimento non deve contenere alcuno stock di proteine standard; vedere Utilizzo delle curve standard per i dettagli).

–Selezionare Measure (Misura) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata, la misurazione dello standard inizia automaticamente quando si abbassa il braccio. (Questa opzione non è disponibile per le misurazioni in cuvetta.)

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

6. Misurazione degli standard rimanenti:

–Pipettare 2 µL di standard 1 sul piedistallo o inserire la cuvetta dello standard 1.

–Selezionare Measure (Misura) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

–Ripetere i passaggi secondari riportati sopra per ogni standard aggiuntivo (una volta misurato il numero specificato di standard e replicati, un messaggio chiede se misurare nuovamente gli standard, caricare atri standard o iniziare a misurare i campioni).

–Al termine della misurazione degli standard, selezionare Measure Samples (Misura i campioni) (scorrere verso sinistra per visualizzare la curva dello standard) quando si utilizza il software di controllo locale o selezionare la scheda Curve (Curva) quando si utilizza il software PC Control.

7. Misurazione dei campioni:

–Pipettare 2 µL di campione 1 sul piedistallo o inserire la cuvetta del campione 1.

–Selezionare Measure Samples (Misura campioni) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

8. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

9. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta con il campione.

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