Eseguire una misurazione con Protein Lowry

Il saggio Protein Lowry utilizza come reagente colorimetrico di rilevamento il Folin-Ciocalteu per determinare la concentrazione proteica totale in campioni proteici non purificati. Questa applicazione rappresenta un’alternativa alle altre applicazioni colorimetriche per misurare soluzioni proteiche diluite o proteine in presenza di componenti che mostrano un’assorbanza significativa tra 200 nm e 280 nm. Questa applicazione misura l’assorbanza a 650 nm e utilizza una curva standard per calcolare la concentrazione proteica. Per ulteriori informazioni, vedere Utilizzo delle curve standard. Viene applicata una correzione della linea di base a punto singolo.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.

AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

Procedura

1. Dalla schermata principale, selezionare la scheda Proteins (Proteine), quindi selezionare Protein Lowry.

2. Configurare tutte le opzioni di configurazione desiderate e selezionare Save (Salva).

Suggerimento: per questo saggio, si consiglia di impostare Curve Type (Tipo di curva) a 2nd Order Polynomial (Polinomio di 2° grado).

3. Se si utilizza un modello NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, selezionare il percorso di misurazione corretto.

–Se si utilizza una cuvetta, selezionare Cuvette (Cuvetta) dal menu a discesa nella parte superiore dello schermo; in questo modo verranno visualizzate le impostazioni della cuvetta. Selezionare la lunghezza del percorso, la velocità di agitazione e il riscaldamento desiderati, quindi chiudere il menu a discesa.

–Quando si utilizza il piedistallo per la misurazione, lasciare selezionata l’opzione Pedstal (Piedistallo) nella parte superiore dello schermo.

4. Misurazione del bianco:

–Pipettare 2 µL di DI H2O sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio, oppure inserire la cuvetta per il bianco con DI H2O nel portacuvette

Suggerimento: se si utilizza una cuvetta, assicurarsi di allineare il percorso ottico della cuvetta con il percorso ottico dello strumento.

–Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata, la misurazione dello standard inizia automaticamente quando si abbassa il braccio. (Questa opzione non è disponibile per le misurazioni in cuvetta.)

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

5. Misurazione dello standard di riferimento:

–Pipettare 2 µL di soluzione di riferimento sul piedistallo o inserire la cuvetta di riferimento (la soluzione di riferimento non deve contenere alcuno stock di proteine standard; vedere Utilizzo delle curve standard per i dettagli).

–Selezionare Measure (Misura) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

6. Misurazione degli standard rimanenti:

–Pipettare 2 µL di standard 1 sul piedistallo o inserire la cuvetta dello standard 1.

–Selezionare Measure (Misura) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

–Ripetere i passaggi secondari riportati sopra per ogni standard aggiuntivo (una volta misurato il numero specificato di standard e replicati, un messaggio chiede se misurare nuovamente gli standard, caricare altri standard o iniziare a misurare i campioni).

–Al termine della misurazione degli standard, selezionare Measure Samples (Misura i campioni). (scorrere verso sinistra per visualizzare la curva dello standard) quando si utilizza il software di controllo locale o selezionare la scheda Curve (Curva) quando si utilizza il software PC Control.

7. Misurazione dei campioni:

–Pipettare 2 µL di campione 1 sul piedistallo o inserire la cuvetta del campione 1.

–Selezionare Measure Samples (Misura campioni) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

8. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

9. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta con il campione.

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