Migliori pratiche per la misurazione delle proteine

• Isolare e purificare i campioni di proteine prima della misurazione per rimuovere le impurità. A seconda del campione, le impurità potrebbero includere DNA, RNA e alcuni componenti del tampone. Per ulteriori informazioni, vedere Preparazione dei campioni.

Nota I reagenti di estrazione che contribuiscono all’assorbanza tra 200 nm e 280 nm influiranno sui risultati delle misurazioni se presenti nei campioni (anche in quantità minime).

• Assicurarsi che l’assorbanza del campione rientri nei limiti di rilevamento di assorbanza dello strumento.

• Scelta di uno bianco:

–Per l’applicazione Protein A280 Pro, eseguire il bianco con la stessa soluzione tampone utilizzata per risospendere l’analita di interesse. La soluzione di bianco deve avere un pH e una forza ionica simili a quelli della soluzione dell’analita.

• Eseguire un ciclo con il bianco per valutare il contributo di assorbanza della soluzione tampone. Se il tampone mostra una forte assorbanza in corrispondenza o in prossimità della lunghezza d’onda dell’analisi (in genere 280 nm), potrebbe essere necessario scegliere un tampone o un’applicazione diversi, come un saggio colorimetrico (ad esempio, BCA o Pierce 660). Per ulteriori informazioni vedere Scelta e misurazione di un bianco.

Nota I tamponi come Triton X, RIPA e NDSB contribuiscono in modo significativo all’assorbanza e non sono compatibili con le misurazioni dirette di A280.

• Per le misurazioni microvolumetriche:

–Assicurarsi che le superfici del piedistallo siano adeguatamente pulite e condizionate. (Le proteine tendono ad attaccarsi alle superfici del piedistallo).

–Agitare delicatamente (ma accuratamente) con vortex i campioni prima di eseguire una misurazione. Evitare di introdurre bolle durante la miscelazione e il pipettaggio.

–Seguire le migliori pratiche per le misurazioni microvolumetriche.

–Utilizzare un volume di campione di 2 µL. Per ulteriori informazioni, vedere Volumi dei campioni raccomandati.

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