Eseguire una misurazione con Protein A280 Pro

Utilizzare l’applicazione Protein A280 per quantificare i campioni di proteine purificate che contengono aminoacidi come triptofano o tirosina o legami disolfuro cys-cys, che mostrano un’assorbanza a 280 nm con maggiore accuratezza a concentrazioni più elevate (>62,5 A). Questa applicazione riporta la concentrazione proteica misurata a 280 nm e un rapporto di assorbanza (A260/A280). Può essere utilizzata anche una correzione della linea di base a punto singolo. Questa applicazione non richiede una curva standard.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.

Nota Se i campioni da analizzare contengono principalmente legami peptidici e pochi aminoacidi o nessun aminoacido,utilizzare l’applicazione Protein A205 al posto di Protein A280 Pro.

AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

Procedura

1. Dalla schermata principale selezionare la scheda Acclaro Pro, quindi selezionare Protein A280 Pro.

2. Configurare tutte le opzioni di configurazione desiderate e selezionare Save (Salva).

3. Pipettare 1–2 µL di soluzione di bianco sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio.

4. Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Blank (Bianco automatico) è attivata, la misurazione del bianco inizia automaticamente quando si abbassa il braccio.

5. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova.

6. Pipettare 2 µL di soluzione campione sul piedistallo.

7. Avviare la misurazione del campione:

–Se l’impostazione Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata abbassare il braccio, se Auto-Measure (Misurazione automatica) è disattivata abbassare il braccio e selezionare Measure (Misura).

Al termine della misurazione del campione, vengono visualizzati lo spettro e i valori riportati (vedere la sezione successiva).

8. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

9. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova.