Protein Pierce 660

Misura la concentrazione proteica totale di campioni di proteine non purificati utilizzando un reagente colorimetrico di rilevamento proprietario. Eseguire una misurazione con Protein Pierce 660 Risultati riportati Impostazioni Limiti di rilevamento |

Principio del saggio Protein Pierce 660

Il saggio Protein Pierce 660 si basa sul legame di un complesso colorante-metallo proprietario con le proteine in condizioni acide che provoca uno spostamento del massimo di assorbimento del colorante, che viene misurato a 660 nm Il complesso colorante-metallo è di colore bruno-rossastro e diventa verde dopo il legame con le proteine. Il cambiamento di colore è prodotto dalla deprotonazione del colorante a pH basso ed è facilitata dalle interazioni con gruppi di amminoacidi caricati positivamente nelle proteine. Il colorante interagisce principalmente con residui basici, come istidina, arginina e lisina e, in misura minore, tirosina, triptofano e fenilalanina, presenti nelle proteine. Il prodotto di reazione viene misurato a 660 nm e corretto per la linea di base utilizzando il valore di assorbanza a 750 nm.

Il colore prodotto nel saggio è stabile e aumenta in proporzione a un’ampia gamma di concentrazioni proteiche crescenti. È possibile aggiungere un reagente opzionale di compatibilità con detergenti ionici (Ionic Detergent Compatibility Reagent, [IDCR]) al reagente del saggio per aumentare la compatibilità con elevate quantità di detergenti ionici, incluso il tampone campione Laemmli SDS con blu di bromofenolo. L’IDCR si dissolve completamente mediante miscelazione accurata e non ha alcun effetto sul saggio. Kit preformulati di materiale legante le proteine sono disponibili presso il produttore o presso un distributore locale. Per informazioni sull’IDCR, rivolgersi al produttore del kit.

Kit e protocolli del saggio delle proteine

Far riferimento al sito Web di NanoDrop per kit e protocolli aggiornati per gli strumenti NanoDrop Ultra. Seguire le raccomandazioni del fabbricante del kit di saggio per tutti gli standard e i campioni (sconosciuti). Assicurarsi che ciascuno sia sottoposto alla stessa tempistica e alla stessa temperatura per tutta la durata del saggio.

Gli standard proteici per la generazione di una curva standard possono inoltre essere forniti dal fabbricante del kit. Poiché i piedistalli NanoDrop One possono misurare concentrazioni proteiche più elevate rispetto agli spettrofotometri tradizionali a cuvette, potrebbe essere necessario fornire i propri standard proteici a concentrazioni più elevate rispetto a quelle fornite dal fabbricante. Ad esempio, possono essere necessari standard aggiuntivi per garantire che la curva standard copra l’intervallo dinamico del saggio e l’intervallo previsto dei campioni sconosciuti.

Curve standard di Protein Pierce

Per l’analisi colorimetrica delle proteine è necessaria una curva standard.

• Ogni esperimento richiede una curva standard. È possibile eseguire una nuova curva standard selezionando l’opzione Setup standards (Imposta standard) o importare lo standard da un esperimento eseguito in precedenza selezionando Load Standards (Carica standard) nella schermata di configurazione dell’applicazione.

Per ulteriori informazioni, vedere Utilizzo delle curve standard.