Misurazione dsDNA, ssDNA o RNA

Utilizzare le applicazioni dsDNA, ssDNA e RNA per quantificare campioni purificati di DNA a doppio filamento (ds, [double-stranded]) o a filamento singolo (ss, [single-stranded]) o di RNA. Queste applicazioni riportano la concentrazione di acido nucleico e due rapporti di assorbanza (A260/A280 e A260/A230). Può essere utilizzata anche una correzione della linea di base a punto singolo.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.

AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

Procedura

1. Dalla schermata iniziale, selezionare la scheda Nucleic Acids (Acidi nucleici), quindi selezionare dsDNA,ssDNA o RNA, a seconda dei campioni da misurare.

2. Configurare tutte le opzioni di configurazione desiderate e selezionare Save (Salva).

3. Se si utilizza un modello NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, selezionare il percorso di misurazione corretto.

–Se si utilizza una cuvetta, selezionare Cuvette (Cuvetta) dal menu a discesa nella parte superiore dello schermo; in questo modo verranno visualizzate le impostazioni della cuvetta. Selezionare la lunghezza del percorso, la velocità di agitazione e il riscaldamento desiderati, quindi chiudere il menu a discesa.

–Quando si utilizza il piedistallo per la misurazione, lasciare selezionata l’opzione Pedestal (Piedistallo) nella parte superiore dello schermo.

4. Pipettare 1–2 µL di soluzione di bianco sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio, oppure inserire la cuvetta di bianco nel portacuvette.

Suggerimento: se si utilizza una cuvetta, assicurarsi di allineare il percorso ottico della cuvetta con il percorso ottico dello strumento.

5. Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Blank (Bianco automatico) è attivata, la misurazione del bianco inizia automaticamente quando si abbassa il braccio. (Questa opzione non è disponibile per le misurazioni in cuvetta.)

6. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta per il bianco.

7. Pipettare 1-2 µL di soluzione campione sul piedistallo o inserire la cuvetta con il campione nel portacuvette.

8. Avviare la misurazione del campione:

–Piedistallo: se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata, abbassare il braccio; se Auto-Measure (Misurazione automatica) è disattivata, abbassare il braccio e selezionare Measure (Misura).

–Cuvetta: selezionare Measure (Misura).

Al termine della misurazione del campione, vengono visualizzati lo spettro e i valori riportati (vedere la sezione successiva).

9. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

10. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta con il campione.