Protein Bradford

Misura la concentrazione proteica totale di campioni di proteine non purificati utilizzando un reagente colorimetrico di rilevamento blu di Coomassie. Eseguire misurazioni in Protein Bradford Risultati riportati Impostazioni Limiti di rilevamento |

Principio del saggio Protein Bradford

Il saggio Protein Bradford utilizza lo spostamento di assorbanza indotto da proteine del colorante blu di Coomassie per determinare la concentrazione proteica totale. Il complesso proteina-colorante legato viene misurato a 595 nm e corretto per la linea di base utilizzando il valore di assorbanza a 750 nm. Kit pre-formulati di miscela di reagenti stabilizzati contenenti colorante blu di Coomassie, alcol e tensioattivo sono disponibili presso la nostra azienda o presso un distributore locale.

Per massimizzare l’affidabilità con il saggio Protein Bradford:

• Lavorare rapidamente e non lasciare che gli standard o i campioni preparati restino in sede più a lungo del necessario. Il colorante Coomassie e gli aggregati di proteina colorante Coomassie possono formare particelle con un tempo di sviluppo crescente, con conseguenti fluttuazioni significative nelle letture dell’assorbanza.

• Misurare gli standard e i campioni tre volte utilizzando una nuova aliquota per ciascuna misurazione. Per le misurazioni con il piedistallo, il segnale totale dell’analita (proteina-colorante) a 595 nm è limitato a ~0-0,150 A a causa della lunghezza del percorso del piedistallo pari a 1,0 mm, della concentrazione del colorante Coomassie e del pH acido.

Nota Se si dispone di uno strumento modello NanoDrop UltraC o NanoDrop UltraC FL, l’utilizzo dell’opzione cuvetta si tradurrà in un segnale di assorbanza più elevato.

Kit e protocolli del saggio delle proteine

Far riferimento al sito Web di NanoDrop per kit e protocolli aggiornati per gli strumenti NanoDrop Ultra. Seguire le raccomandazioni del fabbricante del kit del saggio per tutti gli standard e i campioni (sconosciuti). Assicurarsi che ciascuno sia sottoposto alla stessa tempistica e alla stessa temperatura per tutta la durata del saggio.

Gli standard proteici per la generazione di una curva standard possono inoltre essere forniti dal fabbricante del kit. Poiché i piedistalli NanoDrop One possono misurare concentrazioni proteiche più elevate rispetto agli spettrofotometri tradizionali a cuvette, potrebbe essere necessario fornire i propri standard proteici a concentrazioni più elevate rispetto a quelle fornite dal fabbricante. Ad esempio, possono essere necessari standard aggiuntivi per garantire che la curva standard copra l’intervallo dinamico del saggio e l’intervallo previsto dei campioni sconosciuti.

Curve standard di Protein Bradford

Per l’analisi colorimetrica delle proteine è necessaria una curva standard.

• Ogni esperimento richiede una curva standard. È possibile eseguire una nuova curva standard selezionando l’opzione Setup standards (Imposta standard) o importare lo standard da un esperimento eseguito in precedenza selezionando Load Standards (Carica standard) nella schermata di configurazione dell’applicazione.

Per ulteriori informazioni, vedere Utilizzo delle curve standard.