Eseguire una misurazione con Protein Pierce 660

Il saggio Protein Pierce 660 utilizza un materiale legante le proteine proprietario come reagente di rilevamento colorimetrico per determinare la concentrazione proteica totale in campioni proteici non purificati. Questa applicazione è adatta per soluzioni proteiche che contengono alte concentrazioni di detergenti, agenti riducenti e altri reagenti di uso comune. L’applicazione Pierce 660 misura l’assorbanza a 660 nm e utilizza una curva standard per calcolare la concentrazione proteica (vedere Utilizzo delle curve standard per maggiori informazioni). Viene applicata una correzione della linea di base a punto singolo.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.

AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

Procedura

1. Nella schermata iniziale, selezionare la scheda Proteins (Proteine), quindi selezionare Protein Pierce 660.

2. Configurare una qualsiasi delle opzioni di configurazione se lo si desidera e selezionare Save (Salva). (Specificare un tipo di curva e il numero di replicati per ogni standard, quindi inserire la concentrazione di ciascuno standard.)

Suggerimento: per questo saggio, raccomandiamo di impostare Curve Type (Tipo di curva) su “Linear” (Lineare).

3. Se si utilizza un modello NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, selezionare il percorso di misurazione corretto.

–Se si utilizza una cuvetta, selezionare Cuvette (Cuvetta) dal menu a discesa nella parte superiore dello schermo; in questo modo verranno visualizzate le impostazioni della cuvetta. Selezionare la lunghezza del percorso, la velocità di agitazione e il riscaldamento desiderati, quindi chiudere il menu a discesa.

–Quando si utilizza il piedistallo per la misurazione, lasciare selezionata l’opzione Pedestal (Piedistallo) nella parte superiore dello schermo.

4. Misurazione del bianco:

–Pipettare 2 µL di soluzione di riferimento sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio oppure inserire la cuvetta della soluzione del riferimento con il bianco nel portacuvette (la soluzione del riferimento non deve contenere alcuno stock di proteine standard; vedere Utilizzo delle curve standard per i dettagli).

Suggerimento: se si utilizza una cuvetta, assicurarsi di allineare il percorso ottico della cuvetta con il percorso ottico dello strumento.

–Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata, la misurazione dello standard inizia automaticamente quando si abbassa il braccio. (Questa opzione non è disponibile per le misurazioni in cuvetta.)

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

5. Misurazione dello standard di riferimento:

–Pipettare 2 µL di soluzione di riferimento sul piedistallo o inserire la cuvetta di riferimento (la soluzione di riferimento non deve contenere alcuno stock di proteine standard; vedere Utilizzo delle curve standard per i dettagli).

–Selezionare Measure (Misura) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

6. Misurazione degli standard rimanenti:

–Pipettare 2 µL di standard 1 sul piedistallo o inserire la cuvetta dello standard 1.

–Selezionare Measure (Misura) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

–Ripetere i passaggi secondari riportati sopra per ogni standard aggiuntivo (una volta misurato il numero specificato di standard e replicati, un messaggio chiede se misurare nuovamente gli standard, caricare altri standard o iniziare a misurare i campioni).

–Al termine della misurazione degli standard, selezionare Measure Samples (Misura i campioni) (scorrere verso sinistra per visualizzare la curva dello standard) quando si utilizza il software di controllo locale o selezionare la scheda Curve (Curva) quando si utilizza il software PC Control.

7. Misurazione dei campioni:

–Pipettare 2 µL di campione 1 sul piedistallo o inserire la cuvetta del campione 1.

–Selezionare Measure Samples (Misura campioni) e attendere il completamento della misurazione.

–Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova, oppure rimuovere la cuvetta.

–Se l’impostazione Replicates (Replicati) è maggiore di 1, ripetere la misurazione.

8. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

9. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta con il campione.

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