Eseguire misurazioni in Oligo DNA Pro o Oligo RNA Pro

Utilizzare le applicazioni Oligo DNA Pro e Oligo RNA Pro per quantificare gli oligonucleotidi che assorbono la luce a 260 nm con maggiore accuratezza a concentrazioni più elevate (>62,5 A). I coefficienti di estinzione molare vengono calcolati automaticamente in base alla sequenza di basi del campione definita dall’utente. Queste applicazioni riportano la concentrazione di acido nucleico e due rapporti di assorbanza (A260/A280 e A260/A230). Può essere utilizzata anche una correzione della linea di base a punto singolo.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli

Nota Se l’oligonucleotide è stato modificato, ad esempio con un colorante fluoroforo, contattare il produttore dell’oligo per stabilire se la modifica contribuisce all’assorbanza a 260 nm. In tal caso, si consiglia di utilizzare l’applicazione Microarray per quantificare la concentrazione di acido nucleico. L’applicazione Microarray include una correzione per rimuovere dal risultato della quantificazione dell’oligo qualsiasi contributo di assorbanza dovuto al colorante.

AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

Procedura

1. Nella schermata iniziale, selezionare la scheda Acclaro Pro quindi selezionare Oligo DNA Pro o Oligo RNA Pro, secondo il caso.

2. Configurare tutte le opzioni di configurazione desiderate e selezionare Save (Salva).

3. Pipettare 1–2 µL di soluzione di bianco sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio.

4. Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Blank (Bianco automatico) è attivata, la misurazione del bianco inizia automaticamente quando si abbassa il braccio.

5. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova.

6. Pipettare 1-2 µL di soluzione campione sul piedistallo.

7. Avviare la misurazione del campione:

–Se l’impostazione Measure (Misurazione automatica) è attivata abbassare il braccio, se Auto-Measure (Misurazione automatica) è disattivata abbassare il braccio e selezionare Measure (Misura).

Al termine della misurazione del campione, vengono visualizzati lo spettro e i valori riportati (vedere la sezione successiva).

8. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

9. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta nuova.

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