タンパク質 Pierce 660法

特許の比色検出試薬を使用して、未精製タンパク質サンプルの総タンパク質濃度を測定します。 タンパク質 Pierce 660法測定 測定結果 設定 検出限界 |

タンパク質 Pierce 660法アッセイの理論

タンパク質Pierce 660法アッセイは、660 nmで測定される色素の吸収極大の変化を引き起こす酸性状態における、特許色素-金属複合体のタンパク質への結合に基づきます。色素-金属複合体は、赤褐色で、タンパク質結合時に緑色に変化します。色の変化は、タンパク質中の正電荷を帯びたアミノ酸基との相互作用により、低いpHでの色素の脱プロトン化により生じます。色素は、主にヒスチジン、アルギニン、リジンなどのタンパク質中の塩基性残基、そして度合いは少なくなるものの、チロシン、トリプトファン、フェニルアラニンと相互作用します。反応生成物は、660 nmで測定され、750 nm吸光度値を使用してベースライン補正されます。

アッセイによる発色は安定で、幅広いレンジでタンパク質濃度の増加に比例して濃くなります。IDCR（Ionic Detergent Compatibility Reagent:イオン性界面活性剤適合性試薬）をアッセイ試薬に追加することで、ブロモフェノールブルーの Laemmli SDS サンプル緩衝液を含む、高濃度のイオン性界面活性剤との共存下でも測定を可能にします。IDCRは、十分混合することで完全に溶解し、アッセイに影響を及ぼしません。タンパク質結合物質のキットは、弊社またはお近くの販売代理店から入手できます。IDCR の詳細については、キットメーカーにお問い合わせください。

タンパク質アッセイキットとプロトコル

NanoDrop Ultra装置の最新のキットおよびプロトコルについては、NanoDropウェブサイトを参照してください。すべてのスタンダードおよびサンプル（未知数）については、アッセイキット製造業者の推奨事項に従ってください。各スタンダードおよびサンプルが、アッセイ全体を通じて同じタイミングと温度になるようにします。

標準曲線を作成するためのタンパク質スタンダードも、キット製造業者から提供される場合があります。NanoDrop Ultra台座は、従来のキュベットベースの分光光度計よりも高いタンパク質濃度を測定できるため、製造業者により提供されたものよりも高い濃度で、独自のタンパク質スタンダードを提供することが必要になる可能性があります。たとえば、追加のスタンダードは、必ず標準曲線がアッセイのダイナミックレンジおよび未知のサンプルの予想される範囲に対応するようにする必要があります。

タンパク質 Pierce法標準曲線

標準曲線は、比色タンパク質アッセイに必要です。

• 各実験には標準曲線が必要です。セットアップスタンダードオプションを選択して新しい標準曲線を作成するか、アプリケーションセットアップ画面でロードスタンダードを選択して、以前に実行した実験から標準をインポートすることができます。

詳細については、「標準曲線との連携」を参照してください。