OD600

600 nmで散乱光を測定することにより、溶液中の微生物由来の培養細胞の濃度を測定します。 OD600測定 測定結果 設定 算出 |

OD600アプリケーションの理論

OD600アプリケーションは、透過光を測定し、その値を使用して吸光度を算出します。分光学において、透過光は、サンプルに吸収されず、サンプルの影響を受けず、それを散乱する光と定義されます。

生体細胞の場合、大部分の入射光は、散乱、反射、吸収されるのではなく、サンプルを透過します。散乱光の量は少なく、測定装置によって異なる可能性があります。結果として、算出される吸光度の測定値は通常非常に低くなります。

算出される吸光度値は、溶液中の細胞密度を cells/mL 単位で算出するために使用されます。生体細胞の光学特性を濃度に関連付ける物理的概念と数式には、以下のものがあります。

• 周囲媒質とは屈折率が異なる細胞は、入射光路からの光を不規則に反射し、散乱します。散乱量はサンプル中の細胞密度に比例します。

• ベールの法則式は、吸光度を濃度に関連付けるために使用されます。詳細については、「OD600測定の算出」を参照してください。

• NanoDrop UltracおよびNanoDrop Ultrac FL機器によるキュベット測定では、正確な吸光度測定値は通常、0.04A～1.5Aの範囲内になります。サンプルの段階希釈は常に、吸光度測定値をこの範囲内に収める必要があります。

• すべての測定は、同種の分光光度計および方法（つまり、台座とキュベット）で行われる必要があります。これは、捕らえられる散乱光の量は、光学的配置によって異なるためです。さまざまな分光光度計または方法が使用されている場合、計算を行い、測定結果に変換係数を適用します。たとえば、台座とキュベットを使用して OD 測定値を比較するために、変換係数は以下のように計算されます。

変換係数 = キュベット OD/台座OD

OD600測定の適切な方法

• サンプルが装置の吸光度検出限界範囲内に収まるようにします。

• 細胞または微生物を懸濁している培地を、ブランクとして使用します。

• ブランキングサイクルを実行して、培地溶液の吸光度寄与を評価します。媒体溶液が分析波長（600nm）またはその近傍で強い吸光度を示す場合は、異なる媒体溶液またはアプリケーションを選択する必要がある場合があります。詳細については、「ブランクの選択と測定」を参照してください。

• 培養が定常期に達する前に、サンプル培養が分析の線形動的範囲を超えないようにするのに必要な希釈にします。線形範囲は、光学的配置に大きく左右されるため、台座測定とキュベット測定ごとに異なります。リニア範囲を設定するために、以下を行います：

–微生物菌株の幼若一晩培養（16時間以内）を使用した一連の希釈を測定します。

–OD600測定を希釈係数に対してグラフ化します。

検出上限値は、希釈係数とOD600測定値の間の線形相関がなくなる、測定された OD600 値です。

• 測定前に、サンプルを静かに十分に混ぜ合わせます。

• マイクロボリューム測定の場合：

–台座表面が適切にクリーニングされ、コンディショニングされていることを確認します。

–混合およびピペット操作時は気泡の混入に気をつけてください。

–沈殿や蒸発を防ぐため、直ちに測定を開始します。

–マイクロボリューム測定の適切な方法に従います。

–2 µLのサンプル量を使用します。詳細については、「推奨サンプル量」を参照してください。

–600nmで低い吸光度を示す希釈サンプルの場合、400 nmなどの代替波長を使用して吸光度を測定したり、マイクロボリューム測定の代わりにキュベットを使用したりします。

• キュベット測定（NanoDrop UltraCおよびNanoDrop UltraC FL機器のみ）の場合：

–清潔なプラスチック、ガラス、または石英キュベットを使用します。

–キュベット測定の適切な方法に従います。

–この分析には自動撹拌機能は使用しないでください。