タンパク質測定の適切な方法

• 不純物を取り除くために、測定前にタンパク質サンプルを分離し、精製します。サンプルによっては、不純物にDNA、RNA、および一部の緩衝液成分が含まれている場合があります。詳細については、「サンプルの準備」を参照してください。

注意 200 nm ～ 280 nmの範囲の吸光度に寄与する抽出試薬は、サンプル中に存在する場合は（残留分でも）測定結果に影響します。

• サンプル吸光度が装置の吸光度検出限界範囲内に収まるようにします。

• ブランクの選択を行います。

–タンパク質A280、タンパク質A280、およびタンパク質とラベルアプリケーションの場合、目的分析物を懸濁するために使用されるのと同じ緩衝液を使用します。ブランク溶液は、サンプルと同じpHおよびイオン強度にする必要があります。

• ブランキングサイクルを実行して、緩衝液の吸光度寄与を評価します。分析波長 (通常、280 nmまたは280 nm) またはそれに近い波長で緩衝液が強い吸光度を示す場合、比色分析 (BCA、Pierce660など) のような、異なる緩衝液またはアプリケーションの選択が必要になる場合があります。詳細については、「ブランクの選択と測定」を参照してください。

注意 Triton X、RIPA、およびNDSBなどの緩衝液は、A280またはA280測定の吸光度に影響を与えるため適しません。

• マイクロボリューム測定の場合：

–台座表面が適切にクリーニングされ、表面張力が確保されていることを確認します。（タンパク質は台座表面にこびり付く傾向があります）。

–サンプルを測定する前に、静かに (ただし十分に) ボルテックスします。混合およびピペット操作時は気泡の混入に気をつけてください。

–マイクロボリューム測定の適切な方法に従います。

–2 µLのサンプル量を使用します。詳細については、「推奨サンプル量」を参照してください。

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