算出

他の核酸アプリケーションと同様にs、オリゴアプリケーションはランベルト・ベールの方程式を使用して、サンプルの吸光係数と光路長に基づいて吸光度を濃度に関連付けます。オリゴヌクレオチドは短い単鎖分子（または繰り返し配列からなるより長い分子）であるため、そのスペクトルおよび吸光係数（e）は、塩基組成および配列に強く依存しています。 （単鎖DNAおよびRNAの一般に受け入れられている吸光係数および係数は、そのままで本質的に無作為化された配列の合理的推定値を提供しますが、短い合成オリゴ配列には提供しません。） 最も正確な結果を得るために、e260の厳密な値を使用してオリゴヌクレオチド濃度を計算します。 NanoDrop ソフトウェアでは、測定される前にオリゴヌクレオチドの塩基配列を指定できます。入力された塩基配列について、ソフトウェアでは吸光係数の計算に適した方程式を使用します。 |  | オリゴヌクレオチドの吸光係数 ソフトウェアは、最近隣法と以下の数式を使用して、特定のオリゴヌクレオチド塩基配列のモル吸光係数を計算します。 説明： e = モル吸光係数（単位：L/mole-cm） e1 = enearest neighbor（隣接塩基法） e2 = eindividual bases（個々の塩基） e3 = e蛍光色素などの修飾
ヒント：吸光係数は、各オリゴヌクレオチドに固有の波長であり、緩衝タイプ、イオン強度、および pH の影響を受ける可能性があります。 |  |
算出される核酸濃度は、260 nmでの吸光度値、使用される係数、およびサンプル光路長に基づきます。シングルポイントベースライン補正（または分析補正）も適用できます。 濃度は、質量単位として報告されます。計算器はインターネット上で利用可能で、サンプル配列に基づいて濃度を質量単位からモル単位に変換します。 260 nm と280 nm、場合によって230 nmでの吸光度値が、測定された核酸サンプルの純度比を算出するために使用されます。純度比は、サンプルの精製時に通常使用される残留溶剤および試薬など、 サンプル中の不純物の存在に影響を受けます。 |  | 測定値 A260吸光度 注記：マイクロボリューム吸光度測定や、10 mm以外の非標準キュベットで測定した場合、スペクトルは 10 mm光路長相当に正規化されます。 • 核酸吸光度値は、正規化されたスペクトルを使用して260 nmで測定されます。[Baseline Correction（ベースライン補正）]が選択されていない場合に表示されるA260値です。 • [Baseline Correction（ベースライン補正）]が選択されている場合、補正波長における吸光度値が、260 nm におけるサンプルの吸光度から差し引かれます。補正された260 nmにおける吸光度が表示され、核酸濃度の計算に使用されます。 A230、A280吸光度 • 230 nm、260 nm、および280 nmで正規化された吸光度値は、A260/A230およびA260/A280比を計算するために使用されます。
|  | サンプル光路長 • マイクロボリューム測定の場合、分析波長でサンプル吸光度に基づいて、最適な光路長（1.0 mm ～ 0.03 mmの範囲）が選択されます。 • キュベット測定では、キュベットモードに切り替えた後に選択された光路長が使用されます（「キュベット設定」を参照）。 • 表示されるスペクトルおよび吸光度値は、10 mm光路長相当に正規化されます。
DNAとRNAを構成する5つのヌクレオチドは多種多様な A260/A280 比を示します。個々に測定されたヌクレオチドの 推定されるA260/A280比を以下に示し ます。 Guanine: 1.15 Adenine: 4.50 Cytosine: 1.51 Uracil: 4.00 Thymine: 1.47 特定の核酸配列のA260/A280比は、存在する4つのヌクレオチドのA260/A280比の加重平均とほぼ等しくなります。 注記：RNAは通常、チミンと比較してウラシルの比率が高いため、260/280 比が高くなる傾向があります。 |  | 測定値 • 核酸濃度 選択した単位（つまり、ng/µL、µg/uL、またはµg/mL）で報告されます。算出は、補正された核酸吸光度値を使用する、変形されたベールの法則に基づきます。 • A260/A280純度比 280 nmで補正された吸光度に対する、260 nmで補正される吸光度の比率。 • A260/A230純度比 230 nmで補正された吸光度に対する、260 nmで補正される吸光度の比率。 注記：核酸サンプル中の各種不純物の存在を示す指標として一般的に使用される純度比（A260/A280 および A260/A230）は、オリゴヌクレオチドには適用されません。これは、オリゴヌクレオチドのスペクトル形状が塩基組成に強く依存するためです。詳細については、サイドバーを参照してください。

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