算出

タンパク質A280アプリケーションは、ランベルト・ベールの方程式を使用して、吸光度と濃度を関連付けます。濃度に関してベールの法則を解くことにより、右に示されている方程式が得られます。 |  | ランベルト・ベールの方程式（濃度の値が求められます） c = A / (e * b) 説明： A = 吸光度単位 (AU) の UV 吸光度 e = L/mol-cm 単位の波長依存のモル吸収係数（または吸光係数） b = cm 単位の光路長 c = モル/リットルまたはモル濃度 (M) 単位の分析物濃度 注記：サンプル溶液の測定された吸光度を、モル吸光係数で割ると、サンプルのモル濃度が得られます。モル濃度値と質量濃度値の違いに関する詳細については、「公開されている 吸光係数」を参照してください。
ペプチドまたはタンパク質の吸光係数は、そのトリプトファン (W)、チロシン (Y)、およびシステイン (C) アミノ酸組成に関連しています。 ヒント：吸光係数は、各タンパク質に固有の波長であり、緩衝タイプ、イオン強度、および pH の影響を受ける可能性があります。 |  | タンパク質の吸光係数 280 nmの吸光係数は、以下の式で示したように、3つの構成アミノ酸の280 nmモル吸光係数の加重和で近似されます。 e = (nW * 5500) + (nY * 1490) + (nC * 125) 説明： e = モル吸光係数 n = 各アミノ酸残基の数 5500、1490、125 = 280 nm におけるアミノ酸のモル吸光係数
このアプリケーションには6つのオプションがあり（右に示されています）、測定された各サンプルに適切な吸光係数を選択することができます。吸光係数はサンプル濃度を算出するためにベールの法則と併用されます。 サンプルの吸光係数が分かっている場合は、e + e + MW (モル) またはe1% (質量) オプションを選択し、値を入力します。係数が分からない場合は、吸光係数を算出するか、またはサンプル溶液に最適なオプションを選択します。 ヒント：理想的には、吸光係数は同じ緩衝液を使用して、既知の濃度で研究対象タンパク質の溶液を使用して実験的に決定される必要があります。 |  | 吸光係数に利用可能なオプション • 1 Abs = 1 mg/mL。サンプルタイプおよび/または吸光係数が不明な場合（タンパク質濃度の概算が生成されます） • BSA（ウシ血清アルブミン、6.7L/gm-cm） • IgG（哺乳類抗体、13.7L/gm-cm） • リゾチーム（卵白リゾチーム、26.4L/gm-cm） • その他のタンパク質（ (e + MW）、ユーザー指定のモル吸光係数 • その他のタンパク質（ (e1%）、ユーザー指定の質量吸光係数 注記：詳細については、「サンプルタイプ」を参照してください。

ほとんどのソースは、リン酸塩またはその他の生理学的緩衝液中で280 -1nmまたはそれに近い波長で測定されたタンパク質の吸光係数を報告します。これらの値は、タンパク質濃度のルーチン評価に十分な精度を持ちます。 |  | 公開されている吸光係数 タンパク質の公開されている吸光係数は、以下のように報告されます。 • M-1cm-1単位の波長依存のモル吸収（または吸光） 係数 (e) • パーセント溶液吸光係数 (e1%) の単位は (g/100 mL)-1cm-1（つまり、1 cm キュベットで測定した 1% または 1 g/100 mL溶液） • 0.1%（つまり、1 mg/mL）溶液のタンパク質吸光度値 ヒント：単位の適用が正確であることを確認するため、公表されている値を慎重に評価します。
右に示されている方程式は、モル吸光係数（emolar）とパーセント吸光係数 (e1%) の関係を示しています。 |  | emolar と e 1%の間の変換 (emolar) * 10 = (e1%) * (MWprotein) モル吸光係数が43,824M-1cm-1で、分子量（MW）が 66,400 Daであるタンパク質のパーセント溶液吸光係数（e1%）を確認するために、上述の方程式を以下のように置き換えて、解きます。 e1% = (emolar * 10) / (MWprotein)) e1% = (43,824 * 10) / 66,400 Da) e1% = 6.6 g/100mL
mg/mL単位のサンプルの濃度 (c) を測定するために、右に示されている方程式および10という変換係数を使用します。 ヒント：NanoDrop Ultraソフトウェアには、タンパク質濃度を報告する際の変換係数が含まれます。 |  | g/100 mLとmg/mLの間の変換 mg/mL単位のCprotein = (A / e1%) * 10 たとえば、リファレンスに対して、280 nmで測定されたタンパク質サンプルの吸光度が5.8Aである場合、タンパク質濃度は以下のように算出されます。 Cprotein = (A / e1%) * 10 Cprotein = (5.8/6.6 g/100 mL) * 10 Cprotein = 8.79 mg/mL

算出されるタンパク質濃度は、280 nmでの吸光度値、選択（または入力）される係数、およびサンプル光路長に基づきます。シングルポイントベースライン補正（または分析補正）を適用できます。 濃度は、質量単位として報告されます。計算器はインターネット上で利用可能で、サンプル配列に基づいて濃度を質量単位からモル単位に変換します。 260 nmおよび280 nmでの吸光度値は、測定されたタンパク質サンプルの純度比を算出するために使用されます。 純度比は、サンプルの精製時に通常使用される残留溶剤および試薬など、サンプル中の不純物の存在に影響を受けます。 |  | 測定値 A280吸光度 注記：マイクロボリューム吸光度測定では、スペクトルは10 mm光路長相当に正規化されます。 • タンパク質吸光度値は、正規化されたスペクトルを使用して280 nmで測定されます。ベースライン補正が選択されていない場合、これは報告されるA280値およびタンパク質濃度を算出するために使用される値になります。 • ベースライン補正が選択されている場合、280 nmで正規化され、ベースライン補正された吸光度値が報告され、タンパク質濃度を算出するために使用されます。 A260吸光度 • 正規化および（選択されている場合は）ベースライン補正された 260 nm における吸光度値を使用して、A260/A280 比を算出します。
|  | 測定値 • タンパク質濃度 選択した単位（mg/mLまたはµg/mL）で報告されます。算出は、補正されたタンパク質吸光度値を使用するランベルト・ベールの方程式に基づきます。 • A260/A280純度比 280 nmで補正された吸光度に対する、260 nmで補正される吸光度の比率。A260/A280純度比が約0.57であることは、一般にタンパク質が「純粋」であると認められています。 注記：純度比はサンプル品質の重要な指標ですが、最高品質の指標は、関心下流アプリケーションの機能です（リアルタイムPCRなど）。 • サンプルタイプ サンプル濃度を計算するためにベールの法則と併用される吸光係数を決定します。 • R2（280 nm） 280 nm測定の最適直線の決定係数 • ベースライン補正 ベースライン補正用に選択された波長とその波長で検出された吸光度。 • 位置 測定が台座から行われたことを表示します。 • 波長のモニタリング レポートに含めたい吸光度値の追加波長を入力します。 • 質量吸光係数（1%溶液）. • モル吸光係数. • 分子量.