蛍光測定の適切な方法

• 未検査の不純物がある場合や、最高精度を得るためには、標準物質を実験サンプルと同じ条件で測定する必要があります。

• 不純物を取り除くために、測定前に核酸サンプルを分離し、精製します。サンプルによっては、不純物にDNA、RNA、遊離ヌクレオチド、タンパク質、一部の緩衝剤成分、および色素が含まれている場合があります。詳細については、「サンプルの準備」を参照してください。

• サンプル濃度が選択したアッセイの限界内であることを確認します。

• NanoDrop Ultra 蛍光アッセイは、すべての溶液が室温（18～28℃）のときに最適な性能を発揮します。温度変動はアッセイの精度に影響を与える可能性があります。

• 台座表面が適切にクリーニングされ、表面張力が確保されていることを確認します。

• 測定前に攪拌および遠心分離を行います。混合およびピペット操作時は気泡の混入に気をつけてください。

• マイクロボリューム測定の適切な方法に従います。

• 2 µLのサンプル量を使用します。詳細については、「推奨サンプル量」を参照してください。

• NanoDrop™ Ultra dsDNA BR蛍光試薬（成分Aに含まれる色素）の変異原性または毒性に関するデータは、現在のところ利用できません。これらの試薬は核酸に結合することが知られています。緩衝液は他のすべての潜在的変異原と同じ安全対策で扱い、色素は地域の規制に従って廃棄してください。

• NanoDrop™ Ultra RNA BR 蛍光アッセイには高品質のrRNA標準品が含まれています。最適な性能を得るためには、これらの標準品の完全性と濃度を維持することが重要です。したがって、rRNA標準品を他のRNAと同じ注意で扱うことを強くお勧めします。これには以下が含まれます：

–RNaseフリーの手袋、ピペットチップ、チューブなど、適切なRNaseフリーの取扱い技術を使用します。

–チューブの蓋はできるだけ閉じておくことが重要です。

–サンプルを取り出す際、ピペットがチューブの内壁に触れないようにしてください。

–使用後は、rRNA標準品を速やかに冷蔵庫に戻すことをお勧めします。

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• マイクロボリューム測定の適切な方法

• 基本的な装置操作

標準曲線との連携

蛍光分析には標準曲線が必要です。

• 各実験には新しい新しいい標準曲線が必要です。

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注意 NanoDrop Ultra BR 蛍光アッセイには2つのスタンダードが必要です。

• サンプル測定を始める前に、リファレンスとすべてのスタンダードを測定します。最初のサンプルが測定された後は、標準曲線への追加変更は許可されません。

スタンダードを測定すると、ダイアログ画面が表示され、残りのスタンダードを測定するようユーザーに促します。

左にスワイプすると、作成中の標準曲線を確認できます。次に例を示します。

フルオロメーターアプリケーションを使用すると、R²値が表示され、標準曲線が標準データポイントにどの程度適合しているかを示します（1.0は完全に適合していることを意味し、すべての点が曲線上に位置しています）。

1つの画面を左にスワイプすると、スタンダードのデータ表を確認できます。次に例を示します。

前の画面のいずれかで行を長押しすると、個々のスタンダードに関する詳細が表示されます。次に例を示します。

選択した曲線タイプのすべてのスタンダードが測定されると、次のようなメッセージが表示されます：

スタンダードの再測定： 標準測定画面に戻り、以前に実行したスタンダードを選択して再実行できます。

–標準測定画面、標準曲線画面、または標準データ表から、行を長押しすると、[サンプル詳細]ボックスが表示されます。

–[Remeasure（再測定）]を選択します。

さらにスタンダードを読み込む： 設定画面に戻り、測定するスタンダードを追加できます。合計1つのリファレンスと7つのスタンダードを使用できます。dsDNA蛍光またはRNA蛍光アプリケーションを使用する場合、これらのアプリケーションでは2つのスタンダードを使用する必要があるため、このオプションは表示されません。

サンプルの測定：サンプル測定画面に進みます。

注意 両方のスタンダードが測定されると、「Standards Completed（スタンダード完了）」というメッセージが表示されます。すべてのスタンダードを測定した後に「無効なスタンダード」というメッセージが表示される場合は、正しい標準物質を使用してスタンダードを再測定してみてください。