タンパク質BCA法測定

タンパク質BCAアッセイは、未精製のタンパク質サンプル中の総タンパク質濃度を測定するために、比色検出試薬としてビシンコニン酸を使用します。このアプリケーションは、希釈タンパク質溶液や200 nm ～ 280 nm付近に吸光度の高い物質が有り、280 nmや205 nmで直接測定値が不向きなタンパク質サンプルの測定に有効です。このアプリケーションは、562 nmで吸光度を測定し、標準曲線を使用してタンパク質濃度を算出します。シングルポイントベースライン補正が適用されます。

注意事項 • 液体が装置に流れ込み永久的な損傷を引き起こす可能性があるため、装置の上またはその近くで噴射器またはスプレーボトルを使用しないでください。 • 台座でフッ化水素酸（HF）を使用しないでください。フッ化物イオンは石英光ファイバーケーブルに永久的な損傷を与えます。

始める前に...

NanoDrop Ultra装置で台座測定を行う前に、装置のアームを上げて、上側および下側の台座をクリーニングします。少なくとも、台座を新しいラボペーパーで拭きます。詳細については、「台座のクリーニング」を参照してください。

手順

1. ホーム画面から [Proteins（タンパク質）]タブを選択し、タンパク質BCAを選択します。

2. 必要に応じて 設定オプションを設定し、[Save（保存）]を選択します。曲線タイプおよび各スタンダードのレプリケートの数を指定し、各スタンダードの濃度を入力します。

ヒント：このアッセイでは、曲線タイプを[Linear（線形）]に設定することをお奨めします。

3. NanoDrop UltracまたはNanoDrop UltracFLモデルを使用している場合は、正しい測定経路を選択します。

–キュベットを使用する場合は、画面上部のドロップダウンメニューから [Cuvette（キュベット）]を選択します。これによりキュベット設定が表示されます。希望の光路長、攪拌速度、および 加熱を選択し、ドロップダウンメニューを閉じます。

–測定に台座を使用する場合は、画面上部で [Pedestal（台座）]を選択したままにします。

4. ブランクを測定します。

–2 μLのDI H2Oをピペットで取り、下側の台座にアプライし、アームを下げるか、またはDI H2Oイオン水の入ったブランクキュベットをキュベットホルダーに挿入します。

ヒント：キュベットを使用する場合は、キュベットの光路と装置の光路を合わせてください。

–[Blank （ブランク）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

ヒント：[Auto-Blank（自動ブランク）]がオンの場合、アームを下げた後に自動的にブランク測定が開始されます。（このオプションはキュベット測定には利用できません）。

–アームを上げ、新しいラボペーパーで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

5. リファレンススタンダードの測定：

–リファレンス溶液2 µLをピペットで取り、台座に滴下するか、またはリファレンスキュベットを挿入します（リファレンス溶液にはスタンダードタンパク質ストックが全く含まれないようにする必要があります。詳細については、「標準曲線との連携」を参照）。

–[Measure（測定）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

ヒント：[Auto-Blank（自動ブランク）]がオンの場合、アームを下げた後に自動的にブランク測定が開始されます。（このオプションはキュベット測定には利用できません）。

–アームを上げ、新しい実験用ワイプで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

–レプリケート設定が1より大きくなっている場合、測定を繰り返します。

6. 残りのスタンダードを測定します。

–2 µLのスタンダード1をピペットで取り、台座に滴下するか、またはスタンダード1キュベットを挿入します。

–[Measure（測定）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

–アームを上げ、新しい実験用ワイプで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

–レプリケート設定が1より大きくなっている場合、測定を繰り返します。

–各追加のスタンダードについて上述のサブステップを繰り返します (指定した数のスタンダードとレプリケートが測定されたとき、より多くのスタンダードをロードするか、またはサンプルの測定を開始するかを尋ねるメッセージが表示されます)。

–スタンダードの測定が完了した場合は、ローカル制御ソフトウェア使用時は [Measure Samples（サンプル測）定]（左にスワイプして標準曲線を表示）を選択するか、 PC制御ソフトウェア使用時は [曲線]タブを選択します。

7. サンプルを測定します。

–2µL のサンプル1をピペットで取り、台座に滴下するか、またはサンプル1キュベットを挿入します。

–[Measure Samples（サンプル測定）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

–アームを上げ、新しい実験用ワイプで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

–レプリケート設定が1より大きくなっている場合、測定を繰り返します。

8. サンプルの測定が終了したら、[End Experiment（実験終了）]を選択します。

9. アームを上げ、新しいラボペーパーで両方の台座をクリーニングするか、サンプルキュベットを取り外します。

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