マイクロボリュームサンプリング — 仕組み

表面張力 吸光度スペクトル サンプル吸光度 サンプル濃度 ベースライン補正 蛍光サンプル 蛍光サンプル濃度 |

| 表面張力 NanoDrop Ultra 分光光度計および蛍光光度計は、表面張力を利用してサンプルを2つの台座の間に保持します。特許取得済みのサンプル保持システムは、希釈を必要とせずに、高濃度サンプルの測定を可能にします。 上側の台座に埋め込まれた光ファイバーケーブルは、キセノン光源に通じています。下側の台座に埋め込まれた2番目のケーブルは、検出器につながっています。装置のアームが下がっている場合、サンプルは液体カラムを形成し、本質的に2つの光ファイバーケーブルの間の差を埋めます。
| 吸光度スペクトル 光は液柱を通過して検出器に至ります。検出器は吸光度と波長のスペクトルを検出します。スペクトルは、測定された各波長でサンプルの分子により吸収される光の量を示します。 注記：測定精度に影響を与える蒸発を防ぐため、サンプルまたはブランクをロードした後は、アームを迅速に下ろしてください。 左側の例は、核酸サンプルを測定した通常の吸光度スペクトルを示します。スペクトルは190 nm ～ 850 nmまで測定されます。表示される範囲はアプリケーションによって異なります。
| サンプル吸光度 ブランク測定すると、ブランク溶液のリファレンススペクトルが測定され、メモリに保存されます。サンプル測定ごとに、左にある方程式に従って、サンプルの総吸光度を算出するために、サンプル強度とともにブランク強度が使用されます。
ランベルト・ベールの方程式 説明： A = 吸光度単位 (A)の吸光度 e = L/mol-cm 単位の波長依存のモル吸収係数（または吸光係数） b = cm 単位の光路長 c = モル/リットルまたはモル濃度 (M)単位の分析物濃度 | サンプル濃度 左に示されているランベルト・ベールの方程式（ベールの法則）は、サンプル吸光度を濃度と関連付けるために使用されます。 光路長は、測定のたびにリアルタイムで変わる、 2 つの台座の間の距離です。この光路長自動調整テクノロジーは、広いダイナミックレンジの全域で正確な濃度結果を出します。
| ベースライン補正 一部のアプリケーションは、ベースライン補正を各測定に適用するように設定できます。これにより、サンプルスペクトル中の光散乱粒子が原因のオフセットを最小限に抑えます。補正では、基本的にスペクトルをリファレンス波長での0吸光度単位に「固定」して、ゼロに近いリファレンス波長での吸光度値を、スペクトルにわたる各波長での吸光度値から差し引きます。
| サンプル相対蛍光 赤色または青色のLEDが光源として使用され、光は励起フィルターを通過し、液柱を通過して検出器に届きます。そこで蛍光信号の強度が記録され、相対的な蛍光単位に変換されます。
| 蛍光サンプル濃度 濃度データの算出には、少なくとも2つのスタンダードを必要とする曲線フィッティングアルゴリズムが使用されます。NanoDrop Ultra dsDNA BR、RNA蛍光アッセイはすべて、修正されたヒルプロットを使用しています。