タンパク質 Bradford法

Coomassieブルー色素比色検出試薬を使用して、未精製のタンパク質サンプルの総タンパク質濃度を測定します。 タンパク質Bradford法測定 測定結果 設定 検出限界 |

タンパク質Bradford法アッセイの理論

タンパク質Bradford法アッセイは、Coomassieブルー色素のタンパク質誘導による吸光度シフトを利用して、総タンパク質濃度を測定します。結合タンパク質色素複合体は、595 nmで測定され、750 nmで吸光度値を使用してベースライン補正されます。Coomassieブルー色素、アルコール、界面活性剤を含む安定化試薬混合物のキットは、当社または販売代理店から入手できます。

タンパク質Bradford法アッセイで信頼性を最大限にするには：

• 素早く作業を行い、準備したスタンダードまたはサンプルを必要以上に放置しないでください。Coomassie色素－色素アグリゲート、およびCoomassie色素－色素アグリゲートは、発色時間の増加に伴い粒子を形成することがあり、これが吸光度測定値に大きな変動を引き起こす原因となります。

• 測定ごとに新しいアリコートを使用して、スタンダードおよびサンプルを三重測定します。台座測定の場合、595 nmでの全体の被分析物（タンパク質－色素）信号は、台座の1.0 mm光路長、Coomassie色素濃度、および酸pHが原因が原因で、~0 ～ 0.150A に限定されます。

注意 NanoDrop UltraCまたはNanoDrop UltraC FLモデル機器をお使いの場合、キュベットオプションを使用すると、より高い吸光度信号が得られます。

タンパク質アッセイキットとプロトコル

NanoDrop Ultra装置の最新のキットおよびプロトコルについては、NanoDropウェブサイトを参照してください。すべてのスタンダードおよびサンプル（未知数）については、アッセイキット製造業者の推奨事項に従ってください。各スタンダードおよびサンプルが、アッセイ全体を通じて同じタイミングと温度になるようにします。

標準曲線を作成するためのタンパク質スタンダードも、キット製造業者から提供される場合があります。NanoDrop Ultra台座は、従来のキュベットベースの分光光度計よりも高いタンパク質濃度を測定できるため、製造業者により提供されたものよりも高い濃度で、独自のタンパク質スタンダードを提供することが必要になる可能性があります。たとえば、追加のスタンダードは、必ず標準曲線がアッセイのダイナミックレンジおよび未知のサンプルの予想される範囲に対応するようにする必要があります。

タンパク質Bradford法 標準曲線

標準曲線は、比色タンパク質アッセイに必要です。

• 各実験には標準曲線が必要です。セットアップスタンダードオプションを選択して新しい標準曲線を作成するか、アプリケーションセットアップ画面でロードスタンダードを選択して、以前に実行した実験から標準をインポートすることができます。

詳細については、「標準曲線との連携」を参照してください。