タンパク質 Pierce 660法測定

タンパク質 Pierce 660法アッセイは、未精製のタンパク質サンプル中の総タンパク質濃度を測定するために、比色検出試薬として特許タンパク質結合物質を使用します。このアプリケーションは、高濃度の界面活性剤や還元剤およびその他の試薬の共存下でのタンパク質測定に適しています。Pierce 660法アプリケーションは、660 nmでの吸光度を測定し、タンパク質濃度を算出するために標準曲線を使用します（詳細については、「標準曲線との連携」を参照）。シングルポイントベースライン補正が適用されます。

始める前に...

NanoDrop Ultra装置で台座測定を行う前に、装置のアームを上げて、上側および下側の台座をクリーニングします。少なくとも、台座を新しいラボペーパーで拭きます。詳細については、「台座のクリーニング」を参照してください。

注意事項 • 液体が装置に流れ込み永久的な損傷を引き起こす可能性があるため、装置の上またはその近くで噴射器またはスプレーボトルを使用しないでください。 • 台座でフッ化水素酸（HF）を使用しないでください。フッ化物イオンは石英光ファイバーケーブルに永久的な損傷を与えます。

手順

1. ホーム画面から [Proteins（タンパク質）]タブを選択し、タンパク質 Pierce 660法を選択します。

2. 必要に応じて 設定オプションを設定し、[Save（保存）]を選択します。曲線タイプおよび各スタンダードのレプリケートの数を指定し、各スタンダードの濃度を入力します。

ヒント：このアッセイでは、曲線タイプを[Linear（線形）]に設定することをお奨めします。

3. NanoDrop UltracまたはNanoDrop UltracFLモデルを使用している場合は、正しい測定経路を選択します。

–キュベットを使用する場合は、画面上部のドロップダウンメニューから [Cuvette（キュベット）]を選択します。これによりキュベット設定が表示されます。希望の光路長、攪拌速度、および 加熱を選択し、ドロップダウンメニューを閉じます。

–測定に台座を使用する場合は、画面上部で [Pedestal（台座）]を選択したままにします。

4. ブランクを測定します。

–リファレンス溶液2 μLをピペットで取り、下側の台座に滴下し、アームを下げるか、またはリファレンス溶液のブランクキュベットをキュベットホルダーに挿入します（リファレンス溶液にはスタンダードタンパク質ストックが全く含まれないようにする必要があります。詳細については、「標準曲線との連携」を参照してください。

ヒント：キュベットを使用する場合は、キュベットの光路と装置の光路を合わせてください。

–[Blank （ブランク）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

ヒント：[Auto-Blank（自動ブランク）]がオンの場合、アームを下げた後に自動的にブランク測定が開始されます。（このオプションはキュベット測定には利用できません）。

–アームを上げ、新しいラボペーパーで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

5. リファレンススタンダードの測定：

–リファレンス溶液2 µLをピペットで取り、台座に滴下するか、またはリファレンスキュベットを挿入します (リファレンス溶液にはスタンダードタンパク質ストックが全く含まれないようにする必要があります。詳細については、「標準曲線との連携」を参照してください。）

–[Measure（測定）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

–アームを上げ、新しい実験用ワイプで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

–レプリケート設定が1より大きくなっている場合、測定を繰り返します。

6. 残りのスタンダードを測定します。

–2 µLのスタンダード1をピペットで取り、台座に滴下するか、またはスタンダード1キュベットを挿入します。

–[Measure（測定）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

–アームを上げ、新しい実験用ワイプで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

–レプリケート設定が1より大きくなっている場合、測定を繰り返します。

–各追加のスタンダードについて上述のサブステップを繰り返します（指定した数のスタンダードとレプリケートが測定されたとき、スタンダードを再測定するか、より多くのスタンダードをロードするか、またはサンプルの測定を開始するかを尋ねるメッセージが表示されます）。

–スタンダードの測定が完了した場合は、ローカル制御ソフトウェア使用時は [サンプル測定]（左にスワイプして標準曲線を表示）を選択するか、PC制御ソフトウェア使用時は [曲線]タブを選択します。

7. サンプルを測定します。

–2 µLのサンプル1をピペットで取り、台座に滴下するか、またはサンプル1キュベットを挿入します。

–[Measure Samples（サンプル測定）]を選択し、測定が完了するまで待ちます。

–アームを上げ、新しい実験用ワイプで両方の台座をクリーニングするか、キュベットを取り外します。

–レプリケート設定が1より大きくなっている場合、測定を繰り返します。

8. サンプルの測定が終了したら、[End Experiment（実験終了）]を選択します。

9. アームを上げ、新しいラボペーパーで両方の台座をクリーニングするか、サンプルキュベットを取り外します。

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