OD600

600 nm에서 산란광을 측정함으로써 미생물 세포 배양액의 농도를 측정합니다. OD600 측정 보고된 결과 설정 계산 |

OD600 애플리케이션 이론

OD600 애플리케이션은 광 투과율을 측정하고 그 값을 사용하여 흡광도를 계산합니다. 분광학에서, 투과광 샘플에 의해 흡수되거나, 반사되거나 산란되지 않은 모든 빛으로 정의됩니다.

살아있는 세포의 경우, 입사광의 대부분은 산란, 반사 또는 흡수되기보다는 샘플을 통해 투과됩니다. 산란광의 양은 적으며 기기마다 다를 수 있습니다. 그 결과, 계산된 흡광도 값은 일반적으로 매우 낮습니다.

계산된 흡광도 판독값은 cells/mL 단위로 용액 내 세포 밀도를 결정하는 데 사용됩니다. 살아있는 세포의 광학적 특성을 농도와 연관시키는 물리적 개념과 공식은 다음과 같습니다.

•세포는 주변 재질과 다른 굴절률을 가지며, 입사 광경로에서 빛을 무작위로 반사하고 산란시킵니다. 산란되는 빛의 양은 샘플 내 세포 밀도에 비례합니다.

•Beer의 법칙 방정식은 흡광도를 농도와 연관시키는 데 사용됩니다. 자세한 내용은 OD600 측정을 위한 계산을 참조하십시오.

•NanoDrop Ultra c 및 NanoDrop Ultra c FL 기기를 사용한 큐벳 측정의 경우, 정확한 흡광도 판독값은 일반적으로 0.04 A와 1.5 A 사이의 범위에 있습니다. 일반적으로 흡광도 측정을 해당 범위 내로 맞추기 위해 샘플의 연속 희석이 필요합니다.

•모든 측정은 동일한 유형의 분광광도계 및 방법(즉, 받침대 대 큐벳)으로 이루어져야 하며, 이는 산란광의 양이 광학 구성에 따라 다르게 포착되기 때문입니다. 다른 분광광도계나 방법을 사용할 때는 보고된 결과에 변환 인자를 계산하여 적용하십시오. 예를 들어, 받침대와 큐벳을 사용한 OD 판독값을 비교하기 위해 변환 인자를 다음과 같이 계산할 수 있습니다.

변환 인자 = 큐벳 OD/받침대 OD

OD600 측정을 위한 모범 사례

•샘플이 기기의 흡광도 검출 한계 내에 있는지 확인하십시오.

•세포가 담긴 성장 배지나 배양 배지로 블랭크 처리하십시오.

•완충 용액의 흡광도 기여도를 평가하기 위해 블랭킹 사이클을 실행하십시오. 배지 용액이 분석 파장(600 nm) 또는 그 근처에서 강한 흡광도를 보이는 경우, 다른 배지 용액이나 애플리케이션을 선택해야 할 수도 있습니다. 자세한 내용은 블랭크 선택 및 측정을 참조하십시오.

•배양이 정지기에 도달하기 전에 샘플 배양이 어세이의 선형 동적 범위를 초과하지 않도록 필요에 따라 희석하십시오. 선형 범위는 주로 광학 구성에 따라 달라지므로 받침대와 큐벳 측정에 따라 다릅니다. 선형 범위를 결정 시:

–해당 미생물 균주의 신선한 오버나이트 배양(~16시간)을 사용하여 일련의 희석액을 측정하십시오.

–OD600 측정값을 희석 계수에 대해 그래프로 나타내십시오.

상한 검출 한계는 희석 계수와 OD600 판독값 사이의 선형 상관관계가 중단되는 지점의 OD600 측정값입니다.

•측정을 위해 분주하기 직전에 샘플을 부드럽게 그러나 철저히 혼합하십시오.

•마이크로 부피 측정의 경우:

–받침대 표면이 적절히 세척 및 컨디셔닝되어 있는지 확인하십시오.

–혼합 및 피펫팅 시 기포가 생기지 않도록 하십시오.

–침전이나 증발을 방지하기 위해 즉시 측정을 시작하십시오.

–마이크로 부피 측정을 위한 모범 사례를 따르십시오.

–2 µL 부피의 샘플을 사용하십시오. 자세한 내용은 권장되는 샘플 부피를 참조하십시오.

–600 nm에서 낮은 흡광도를 보이는 희석된 샘플의 경우, 흡광도를 측정할 때 400 nm와 같은 대체 파장을 사용하거나, 마이크로 부피 측정 대신 큐벳을 사용하십시오.

•큐벳 측정의 경우(NanoDrop UltraC 및 NanoDrop UltraC FL 기기만 해당):

–깨끗한 플라스틱, 유리 또는 석영 큐벳을 사용합니다.

–큐벳 측정을 위한 모범 사례를 따르십시오.

–해당 어세이에는 자동 교반 기능은 사용하지 마십시오.