마이크로어레이 측정을 위한 계산

다른 핵산 애플리케이션과 마찬가지로, 마이크로어레이 애플리케이션은 샘플 농도를 계산하기 위해 소광 계수와 경로 길이가 결합되어 "factor(인자)"라고 불리는 Beer-Lambert 방정식의 수정된 버전 을 사용합니다. 마이크로어레이 애플리케이션은 각 측정 샘플의 적절한 인자를 선택할 수 있는 여섯 가지 옵션(오른쪽에 표시됨)을 제공하며, 이는 Beer의 방정식과 함께 사용되어 샘플 농도를 계산합니다. 인자를 알고 있는 경우, Custom Factor(맞춤형 인자) 옵션을 선택하고 ng-cm/µL 단위로 인자를 입력하십시오. 그렇지 않다면 샘플 용액에 가장 적합한 옵션을 선택하십시오. 팁:이상적으로는 인자 또는 소광 계수는 동일한 완충용액을 사용하여 알려진 농도의 분석 대상 핵산 용액을 이용하여 경험적으로 결정되어야 합니다. |  | 인자에 대해 사용 가능한 옵션 •dsDNA (인자 = 50 ng-cm/µL) •ssDNA (인자 = 33 ng-cm/µL) •RNA (인자 = 40 ng-cm/µL) •Oligo DNA (사용자가 입력한 DNA 뉴클레오타이드 시퀀스에서 계산됨) •Oligo RNA (사용자가 입력한 RNA 뉴클레오타이드 시퀀스에서 계산됨) •맞춤형 인자(15 ng-cm/µL와 150 ng-cm/µL 사이의 사용자 입력 인자) 참고: 자세한 내용은 Sample Type (샘플 유형)을 참조하십 시오.
계산된 핵산 농도는 260 nm에서의 흡광도 값, 사용된 인자 및 샘플 경로 길이를 기반으로 합니다. 단일 지점 기준선 교정(또는 분석 교정)도 적용될 수 있습니다. 농도는 질량 단위로 보고됩니다. 샘플 시퀀스를 기반으로 질량 농도를 몰 농도로 변환할 수 있는 계산기를 인터넷에서 이용할 수 있습니다. 260 nm, 280 nm 및 때로는 230 nm에서의 흡광도 값은 측정된 핵산 샘플의 순도 비율을 계산하는 데 사용됩니다. 순도 비율은 샘플 내 잔류 용매나 정제 과정에서 사용된 시약과 같은 오염 물질에 민감합니다. |  | 측정된 값 A260 흡광도 참고: 스펙트럼의 모든 파장에서 850 nm에서의 흡광도 값이 차감됩니다. 그 결과, 표시된 스펙트럼에서 850 nm에서의 흡광도는 0입니다. 또한, 마이크로 부피 흡광도 측정 및 비표준(10 mm 이외의) 큐벳으로 수행된 측정의 경우, 스펙트럼은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다. •모든 마이크로어레이 샘플 유형의 핵산 흡광도 값은 850 교정 및 260 nm 정규화된 스펙트럼을 사용하여 측정됩니다. •분석 교정이 선택된 경우, 교정 파장에서의 흡광도 값은 260 nm에서의 흡광도에서 차감됩니다. •하나 이상의 염료가 선택된 경우, 260 nm에서의 염료교정 값도 260 nm 흡광도에서 차감됩니다. •최종 교정된 260 nm 흡광도 값이 보고되며, 이는 샘플 농도 계산에 사용됩니다. A280 흡광도 •850 교정 및 정규화된 280 nm 흡광도 값(A280 염료 교정 차감 후)은 A260/A280 비율 계산에 사용됩니다.
염료 농도는 염료의 분석 파장에서의 흡광도 값, 염료의 소광 계수, 샘플의 경로 길이를 기준으로 계산됩니다. |  | 염료 흡광도 •염료 흡광도 값은 특정 파장에서 측정됩니다. 분석에 사용되는 파장에 대해서는 Dye/Chromophore Editor(염료/발색단 편집기)를 참조하십시오. •교정된 기준선 염료 흡광도 값이 보고되고, 이는 염료 농도 계산에 사용됩니다. 염료 교정 •사전 정의된 염료는 A260 및 A280에 대한 알려진 교정값을 가지고 있습니다. 사용된 교정값에 대해서는 Dye/Chromophore Editor(염료/발색단 편집기)를 참조하십시오. •A260 염료 교정은 핵산 농도를 계산에 사용되는 A260 흡광도 값과 A260/A280 순도 비율을 계산하는 데 사용되는 A260 흡광도 값에서 차감됩니다.
|  | 샘플 경로 길이 •마이크로 부피 측정의 경우, 소프트웨어는 분석 파장에서 샘플 흡광도를 기반으로 최적의 경로 길이(1.0 mm에서 0.03 mm 사이)를 선택합니다. •큐벳 측정의 경우, 큐벳 모드로 전환한 후 선택된 경로 길이가 사용됩니다. (큐벳 설정을 참조) •표시된 스펙트럼 및 흡광도 값은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다.
|  | 보고된 값 •핵산 농도. 선택된 단위(즉, ng/µL, µg/uL 또는 µg/mL)로 보고됩니다. 계산은 교정된 핵산 흡광도 값을 사용하여 수정된 Beer의 법칙 방정식을 기반으로 합니다. •A260/A280 순도 비율. 260nm에서의 교정된 흡광도 대비 280nm에서의 교정된 흡광도의 비율입니다. A260/A280 비율이 DNA의 경우 ~1.8(RNA는 ~2.0)면 일반적으로 "순수"하다고 간주됩니다. 산성 용액에서는 보고값이 0.2~0.3 낮게 나타날 수 있으며, 염기성 용액에서는 그 반대입니다. •염료 1/염료 2 농도. pmol/µL 단위로 보고됩니다. 계산은 기준선 교정된 염료 흡광도 값을 사용하여 Beer의 방정식에 따라 수행됩니다. 참고: 순도 비율은 샘플 품질의 중요한 지표이지만, DNA 또는 RNA 품질의 가장 좋은 지표는 관심 있는 다운스트림 응용에서의 기능성입니다(예: 마이크로어레이).

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