Bradford 단백질

정제되지 않은 단백질 샘플의 총 단백질 농도를 쿠마시 블루 염료 비색 검출 시약을 사용하여 측정합니다. Bradford 단백질 측정 보고된 결과 설정 검출 한계 |

Bradford 단백질 어세이의 이론

브래드포드 단백질 어세이는 쿠마시 블루 염료의 단백질 유도 흡광도 변화를 이용하여 총 단백질 농도를 결정합니다. 결합된 단백질-염료 복합체는 595 nm에서 측정되며, 750 nm에서의 흡광도 값을 사용하여 기준선이 교정됩니다. 쿠마시 블루 염료, 알코올 및 계면활성제가 포함된 안정화 시약 혼합물의 사전 제조 키트는 당사 또는 현지 유통업체를 통해 구입할 수 있습니다.

Bradford 단백질 어세이의 신뢰성을 극대화하려면 다음을 준수하십시오.

•신속하게 작업하고 준비된 표준 물질이나 샘플은 불필요하게 오래 방치하지 마십시오. 쿠마시 염료-염료 및 쿠마시 염료-단백질 응집체는 반응 시간이 길어짐에 따라 입자 형태로 형성될 수 있으며, 이는 흡광도 측정값에 상당한 변동을 유발할 수 있습니다.

•각 측정마다 새로운 분주를 사용하여 표준 물질과 샘플을 3회 반복 측정하십시오. 받침대 측정의 경우, 595 nm에서의 총 분석 물질(단백질-염료) 신호는 받침대의 1.0 mm 경로 길이, 쿠마시 염료의 농도 및 산성 pH로 인해 0~0.150A로 제한됩니다.

알림 NanoDrop UltraC 또는 NanoDrop UltraC FL 모델 기기를 사용하는 경우, 큐벳 옵션을 사용하면 더 높은 흡광도 신호를 얻을 수 있습니다.

단백질 어세이 키트 및 프로토콜

NanoDrop Ultra 기기에 대한 최신 키트와 프로토콜은 NanoDrop 웹사이트를 참조하십시오. 모든 표준 물질 및 샘플(미지 샘플)에 대해서는 어세이 키트 제조업체의 권장 사항을 따르십시오. 어세이 과정 전반에 걸쳐 각 샘플이 동일한 시간과 온도에 노출되도록 하십시오.

표준 곡선을 생성하기 위한 단백질 표준 물질은 키트 제조업체에서도 제공할 수 있습니다. NanoDrop Ultra 받침대는 기존의 큐벳 기반 분광 광도계보다 더 높은 단백질 농도를 측정할 수 있으므로, 제조업체가 제공하는 것보다 더 높은 농도의 단백질 표준 물질을 직접 준비해야 할 수도 있습니다. 예를 들어, 표준 곡선이 어세이의 동적 범위와 미지 샘플의 예상 범위를 포함하도록 보장하기 위한 추가적인 표준 물질이 필요할 수 있습니다.

Bradford 단백질 표준 곡선 화면

비색 단백질 분석에는 표준 곡선이 필요합니다.

•각 실험마다 표준 곡선이 요구됩니다. 애플리케이션 설정 화면에서 Setup standards(표준 설정) 옵션을 선택하여 새로운 표준 곡선을 실행하거나, Load standards(표준 불러오기)를 선택하여 이전에 실행한 실험에서 표준 곡선을 불러올 수 있습니다.

자세한 내용은 표준 곡선 작업을 참조하십시오.