형광 측정을 위한 모범 사례

•시험되지 않은 오염 물질이 있는 경우나 가장 높은 정확도를 원할 경우, 표준 물질은 실험 샘플과 동일한 조건에서 분석(어세이)되어야 합니다.

•핵산 샘플을 측정하기 전에 분리 및 정제하여 불순물을 제거하십시오. 샘플에 따라 불순물에는 DNA, RNA, 유리 뉴클레오티드, 단백질, 일부 완충용액 구성 요소 및 염료가 포함될 수 있습니다. 자세한 내용은 샘플 준비를 참조하십시오.

•샘플 농도가 선택한 어세이의 한계 내에 있는지 확인하십시오.

•NanoDrop Ultra 형광 어세이는 모든 용액이 실온(18~28 °C)에 있을 때 최적의 성능을 제공합니다. 온도 변화는 어세이 정확도에 영향을 줄 수 있습니다.

•받침대 표면이 적절히 세척 및 컨디셔닝 되어 있는지 확인하십시오.

•측정하기 전에 볼텍싱하고 원심분리하십시오. 혼합 및 피펫팅 시 기포가 생기지 않도록 하십시오.

•마이크로 부피 측정을 위한 모범 사례를 따르십시오.

•2 µL 부피의 샘플을 사용하십시오. 자세한 내용은 권장되는 샘플 부피를 참조하십시오.

•NanoDrop™ Ultra dsDNA BR 형광 시약(성분 A의 염료)의 변이원성 또는 독성에 대한 데이터는 현재 없습니다. 이 시약은 핵산에 결합하는 것으로 알려져 있습니다. 다른 모든 잠재적 변이원성 물질과 동일한 안전 예방 조치로 완충용액을 취급하고 현지 규정에 따라 염료를 폐기하십시오.

•NanoDrop™ Ultra RNA BR 형광 어세이에는 고품질 rRNA 표준 물질을 포함합니다. 최적의 성능을 위해 이러한 표준 물질의 무결성과 농도를 유지하는 것이 중요합니다. 따라서 rRNA 표준 물질을 다른 모든 RNA와 동일한 주의로 취급할 것을 강력히 권장합니다. 여기에는 다음을 포함합니다.

–RNAse-free 장갑, 피펫 팁 및 튜브와 같이 적절한 RNAse-free 취급 기술을 사용하십시오.

–가능하면 항상 튜브 뚜껑을 닫아 두는 것이 중요합니다.

–샘플을 빼낼 때 피펫이 튜브의 내벽에 닿지 않도록 하십시오.

–rRNA 표준 물질은 사용 후, 즉시 냉장고에 보관하십시오.

관련 주제

•마이크로 부피 샘플 측정

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•기본 기기 작동

표준 곡선 작업하기

형광 분석에는 표준 곡선이 필요합니다.

•각 실험마다 새로운 표준 곡선이 요구됩니다.

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알림 NanoDrop Ultra BR 형광 어세이에서는 2개의 표준 물질이 필요합니다.

•모든 표준 물질은 샘플 분석을 시작하기 전에 측정하십시오. 첫 번째 샘플이 측정된 이후에는 표준 곡선에 대한 추가 변경이 허용되지 않습니다.

표준 물질을 측정하는 동안, 사용자에게 나머지 표준 물질의 측정을 안내하는 대화창 화면이 나타납니다.

구축할 때, 한 화면을 왼쪽으로 스와이프하여 표준 곡선을 봅니다. 다음은 한 예시입니다.

형광 측정기 애플리케이션을 사용할 때, R2값이 나타나며 이는 표준 곡선이 표준 데이터 포인트에 얼마나 잘 맞는지를 나타냅니다(1.0은 완벽한 적합; 모든 포인트가 정확히 곡선 위에 있음).

화면을 왼쪽으로 스와이프하여 표준 물질에 대한 데이터가 포함된 표를 확인하십시오. 다음은 한 예시입니다.

이전 화면에서 아무 행이나 길게 누르면, 해당 표준 물질에 대한 세부 정보를 확인할 수 있습니다. 다음은 한 예시입니다.

선택한 곡선 유형에 대해 두 표준 물질이 모두 측정된 후, 다음과 유사한 메시지가 나타납니다.

표준 재측정: 표준 측정 화면으로 돌아가면, 이전에 실행된 표준을 선택하여 재실행할 수 있습니다.

–표준 곡선 화면 또는 표준 데이터 테이블에서, 재측정할 표준 물질의 행을 길게 누르면 Sample Details(샘플 세부정보) 박스가 표시됩니다.

–Remeasure(재측정)를 선택합니다.

더 많은 표준 불러오기: 추가로 측정할 표준 물질을 추가할 수 있는 설정 화면으로 돌아갑니다. 총 1개의 기준 물질과 7개의 표준 물질을 사용할 수 있습니다. dsDNA 형광 또는 RNA 형광 애플리케이션을 사용할 때, 이 옵션은 나타나지 않으며 이러한 애플리케이션에서는 2개의 표준 물질을 사용해야 합니다.

Measure samples(샘플 측정): 샘플 측정 화면에서 계속 진행합니다.

알림 두 표준 물질이 모두 측정된 후, "Standards Completed"(표준 완료)메시지가 나타나야 합니다. 모든 표준 물질을 측정한 후 "Invalid Standards"(유효하지 않은 표준) 메시지가 표시되면, 올바른 표준 물질을 사용하여 표준 물질을 재측정해 보십시오.