오염물질 분석

dsDNA, RNA 및 Protein A280 애플리케이션의 경우, NanoDrop Ultra 소프트웨어는 측정 중 여러 알려진 오염 물질에 대해 자동으로 스펙트럼 분석을 시작합니다. 알려진 오염물질의 예시는 다음과 같습니다.

•dsDNA 및 RNA 측정의 경우:

–분석 영역: 단백질 및 페놀

–구아니딘염산염 및 구아니딘 이소티오시아네이트의 존재 감지

–RNA 애플리케이션에서 종 특이적 dsDNA 오염 감지 및 dsDNA 애플리케이션에서 종 특이적 RNA 오염 감지

•단백질 측정의 경우:

–분석 영역: 핵산 및 페놀

샘플에서 오염 물질이 식별되는 경우, "Contaminant Analysis"(오염물질 분석) 아이콘이 측정 결과 왼쪽에 나타납니다.

아이콘을 탭하면 오염물질 분석 결과 및 관련 정보를 확인할 수 있습니다.

다음은 단백질 오염 물질이 측정 결과에 영향을 미칠만큼 충분히 포함된 핵산 오염 물질 분석 결과의 예시입니다.

1총 샘플 흡광도(샘플 + 오염물질) 기준

2교정된 샘플 흡광도(샘플 - 오염물질) 기준

단백질은 핵산 분석 파장(230 nm, 260 nm 및 280 nm) 근처에서 빛을 흡수하기 때문에, 위에 표시된 핵산 샘플 내 단백질이 존재할 경우 A260/A280 및 A260/A230 비율이 범위를 벗어나 보고된 핵산 농도가 실제 값보다 높게 나타납니다. 소프트웨어는 불순물(단백질)을 식별하고 다음을 보고합니다.

•분석 파장(260 nm)에서 단백질에 의한 기준선 교정 흡광도(0.18)

•측정 결과의 변동 계수(%)(불확실성 x 100/측정 결과 = 14.03%; 높은 %CV는 측정 결과가 기기 검출 한계에 근접했거나 간섭 성분이 있음을 나타냄)

•원본 핵산 농도(59.5 ng/µL), 이는 분석 파장에서의 총 기준선 교정 흡광도(샘플 + 오염물질)를 기준으로 함

•교정 핵산 농도(49.5 ng/µL), 이는 분석 파장에서의 교정된 흡광도(샘플 - 오염물질)를 기준으로 함

오염물질 분석 이론

UV 및 UV-가시광선 흡광도 측정은 각각 260 nm 및 280 nm에서 핵산 및 단백질 샘플의 정량에 사용됩니다. 이 분석은 주어진 파장에서 혼합 용액의 총 흡광도가 혼합물 내 각 구성 요소의 흡광도 값을 합한 것이라는 사실에 기반합니다.

이 방법의 지속적인 과제는 추출 과정에서 사용되는 여러 물질이 스펙트럼 전반에 걸쳐 다양한 영역에서 흡수할 수 있다는 점입니다. 샘플에 이러한 오염물질이 존재할 때, 관심 파장에서의 흡광도를 인위적으로 증가시켜 분석을 방해할 수 있으며, 이로 인해 분석 물질의 농도가 과대 추정될 수 있습니다.

전통적으로, 순도 비율은 다운스트림 애플리케이션에 영향을 미칠 수 있는 오염물질의 존재를 감지하는 데 사용됩니다. 그러나, 순도 비율만으로는 오염 가능성에 대한 완전한 정보를 제공할 수 없습니다. 순도 비율이 예상 범위를 벗어나는 경우,스펙트럼 프로필을 정성적으로 검사하는 경우가 많습니다.

당사의 Acclaro 기술은 오염물질 분석에 정량적 접근법을 적용합니다. 정교한 수학적 알고리즘을 통해, Acclaro는 스펙트럼 데이터를 분석하여 샘플 내 가능성 있는 오염물질을 식별하고 샘플 결과에서 오염물질로 인한 모든 기여를 제거합니다. 이를 통해 분석 대상 물질의 더 정확한 농도 값 및 오염 수준에 대한 보다 정량적인 분석이 가능해집니다.

순수 화합물의 스펙트럼은 해당 화합물에 고유하기 때문에, 상호작용이 거의 없는 물질들로 주로 구성된 혼합 스펙트럼은, 수학적으로 각 구성요소의 스펙트럼으로 분해되고 구성요소를 식별할 수 있습니다. 오염물질 분석 알고리즘은 분석 파장(핵산의 경우 260 nm, 단백질의 경우 280 nm) 주변의 좁은 스펙트럼 영역(220-285 nm)을 사용하여 해당 영역에서 흡수가 가능하다고 알려진 오염물질(단백질이나 핵산, 그리고 페놀)로부터의 흡광도 기여를 결정합니다. 전체 스펙트럼은 핵산 정제에 일반적으로 사용되는 시약인 구아니딘 HCl 및/또는 구아니딘 이소티오시아네이트와 같은 다른 오염 물질의 존재 여부를 판단하기 위해 분석됩니다.

알림 일관된 고품질의 오염 물질 분석 결과를 얻는 것은 측정된 샘플 스펙트럼의 품질에 달려 있으며, 이는 장비의 유지보수 상태에 따라 달라집니다. 자세한 정보는 유지보수 일정을 참조합니다.