계산

Acclaro Pro 핵산 애플리케이션은 샘플 농도를 계산하기 위해 소광 계수와 경로 길이가 결합되어 "인자"라고 불리는 Beer-Lambert 방정식의 수정된 버전(오른쪽에 표시됨)을 사용합니다. |  | 소광 계수 대 인자 Beer-Lambert 방정식에 따른 용어를 사용할 때, 인자(f)는 다음과 같이 정의됩니다. 인자(f) = 1/(e * b) 여기에서: e = 파장에 따라 달라지는 몰 흡광 계수(단위: ng-cm/µL) b = 샘플의 경로길이(단위: cm) 결과적으로, 분석 물질 농도(c)는 다음과 같이 계산됩니다. c = A * [1/(e * b)] 또는 c = A * f 여기에서: c = 분석 물질 농도(단위: ng/µL) A = 흡광도(흡광도 단위: A) f = 인자(ng-cm/µL)(아래 참조)
dsDNA Pro, ssDNA Pro 및 RNA Pro 애플리케이션의 경우, 일반적으로 인정되는 핵산의 인자가 Beer의 법칙과 함께 사용되어 샘플 농도를 계산합니다. Custom Factor Pro 애플리케이션의 경우, 사용자가 지정한 인자를 사용합니다. |  | 사용되는 인자 •dsDNA (인자 = 50 ng-cm/µL) •ssDNA (인자 = 33 ng-cm/µL) •RNA (인자 = 40 ng-cm/µL) •맞춤형 인자(15 ng-cm/µL와 150 ng-cm/µL 사이의 사용자 입력 인자)
계산된 핵산 농도는 260 nm에서의 흡광도 값, 사용된 인자 및 샘플 경로 길이를 기반으로 합니다. 단일 지점 기준선 교정(또는 분석 교정)도 적용될 수 있습니다. 농도는 질량 단위로 보고됩니다. 샘플 시퀀스를 기반으로 질량 농도를 몰 농도로 변환할 수 있는 계산기를 인터넷에서 이용할 수 있습니다. 260 nm, 280 nm 및 때로는 230 nm에서의 흡광도 값은 측정된 핵산 샘플의 순도 비율을 계산하는 데 사용됩니다. 순도 비율은 샘플 내 잔류 용매나 정제 과정에서 사용된 시약과 같은 오염 물질에 민감합니다. |  | 측정된 값 참고: 마이크로 부피 흡광도 측정의 경우, 스펙트럼은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다. A260 흡광도 •핵산 흡광도 값은 260 nm에서 개선된 알고리즘으로 정규화된 스펙트럼을 사용하여 측정됩니다. 기준선 교정이 선택되지 않은 경우 이 값이 보고되는 A260 값입니다. •기준선 교정이 선택된 경우, 교정 파장에서의 흡광도 값은 260 nm에서의 흡광도에서 차감됩니다. 교정된 260 nm 흡광도 값이 보고되며, 이는 핵산 농도 계산에 사용됩니다. A230 및 A280 흡광도 •정규화 및 기준선 교정된(선택된 경우) 흡광도 값(230 nm 및 280 nm에서)은 A260/A230 및 A260/A280 비율을 계산하는 데 사용됩니다.
|  | 보고된 값 •핵산 농도. 선택된 단위(즉, ng/µL, µg/uL 또는 µg/mL)로 보고됩니다. 계산은 교정된 핵산 흡광도 값을 사용하여 수정된 Beer의 법칙 방정식을 기반으로 합니다. •A260/A280 순도 비율. 260nm에서의 교정된 흡광도 대비 280nm에서의 교정된 흡광도의 비율입니다. A260/A280 비율이 DNA의 경우 ~1.8(RNA는 ~2.0)면 일반적으로 "순수"하다고 간주됩니다. 산성 용액에서는 보고값이 0.2~0.3 낮게 나타날 수 있으며, 염기성 용액에서는 그 반대입니다. •A260/A230 순도 비율. 260nm에서의 교정된 흡광도 대비 230nm에서의 교정된 흡광도의 비율. A260/A230 비율이 DNA의 경우 1.8에서 2.2 사이라면 일반적으로 "순수"하다고 간주됩니다. 참고: 순도 비율은 샘플 품질의 중요한 지표이지만, 품질의 가장 좋은 지표는 관심 있는 다운스트림 애플리케이션에서의 기능성입니다(예: 실시간 PCR). •A260 흡광도. •A280 흡광도. •R2 (260nm). 260 nm 측정에 대한 최적 적합선의 결정 계수. •인자. Beer의 법칙과 함께 사용하여 샘플 농도를 계산. •기준선 교정. 기준선 교정을 위해 선택된 파장 및 해당 파장에서 검출된 흡광도. •위치. 측정이 받침대 모드에서 수행되었음을 표시. •모니터링된 파장. 보고서에 포함하고자 하는 흡광도 값을 가진 추가 파장을 입력합니다.