샘플 및 블랭크 준비

샘플 준비

•기기로 측정하기 전에 샘플을 분리하고 정제하십시오. 이 목적을 위한 상업용 샘플 분리 키트를 사용할 수 있으며, 또는 내부 프로토콜을 사용할 수도 있습니다. 정제 후, 관심 분석 물질은 측정 전, 수용성 완충용액에 용해시키는 것이 일반적입니다.

팁:분석 파장에서 빛을 흡수하는 모든 분자는 샘플 농도 계산에 사용되는 총 흡광도 값에 기여합니다.

•최종 분석 물질의 농도가 기기의 흡광도 검출 한계 내에 있는지 확인하십시오.

•마이크로 부피 측정의 경우, 측정 전에 각 샘플을 부드럽게(그러나 철저히) 볼텍싱하십시오.

혼합 및 피펫팅 시 기포가 생기지 않도록 하십시오.

알림 헥산과 같이 극도로 휘발성이 높은 용매에 용해된 샘플은 큐벳 샘플링 옵션이 가장 잘 작동할 수 있습니다(NanoDrop Ultra 및 NanoDrop Ultra c FL 기기 전용).

블랭크 선택 및 측정

샘플 분석 물질을 재현탁하는 데 사용된 완충용액은 흡광도에 기여할 수 있습니다. 블랭킹은 샘플 측정 시 완충용액의 구성 요소로 인한 흡광도 기여를 최소화합니다. 그 결과 샘플 스펙트럼은 분석 대상 물질의 흡광도만을 나타냅니다.

최상의 결과를 위해:

•대부분의 애플리케이션에서는, 분석 대상 물질을 재현탁하는 데 사용한 것과 동일한 완충용액을 이용하여 블랭킹합니다. 기준(블랭킹)용액은 분석 물질 용액과 유사한 pH와 이온 강도를 가져야 합니다.

•각 샘플 세트 전에 새로운 블랭크를 측정하십시오. 샘플이 서로 다른 완충용액에 용해되어 있지 않는 한, 각 샘플 측정 전에 기기를 블랭크할 필요는 없습니다.

•30분마다 새로운 블랭크를 측정하십시오.

•블랭킹 사이클을 샘플 측정에 사용하기 전에 블랭킹 용액의 적합성을 평가하기 위해 실행하십시오.

결과 스펙트럼은 스펙트럼 전반에서 애플리케이션에 따라 0.02 A 또는 0.4 A
(10 mm 등가) 이상 변동되지 않아야 하며, 특히 아래 예시와 같은 분석 파장에서는 더욱 그러합니다.

분석 파장 부근에서 스펙트럼의 흡광도 값이 0.02 A 또는 0.4 A(10 mm 환산 기준)를 초과하는 경우,해당 완충용액은 특히 저농도 샘플 분석에 지장을 줄 수 있습니다. 자세한 내용은 아래를 참조하십시오.

블랭킹과 관련된 문제

•블랭크 측정 전에 받침대나 큐벳에 샘플 잔여물이 남아 있었음. (결과 샘플 스펙트럼은 음의 흡광도 값을 보일 수 있으며, 이는 스펙트럼의 해당 영역에서 블랭크가 샘플보다 더 많은 흡광도를 가졌음을 나타냅니다.)

•블랭크 측정이 분석 파장에서 알려지지 않은 샘플보다 높은 흡광도를 나타냄.
(블랭크로 사용된 완충용액이 샘플을 재현탁하는 데 사용된 것과 구성이 다를 경우, 측정 결과는 정확하지 않습니다.)

•기기를 블랭크 처리할 때 실수로 샘플이 사용되었습니다. (결과 샘플 스펙트럼은 음의 흡광도 값을 보이거나, 일부 경우에는 아래 예시와 같이 전형적인 순수 핵산 또는 단백질 스펙트럼의 거울상과 유사할 수 있습니다.)

블랭킹 문제 해결 방법

•양쪽 받침대를 철저히 세척 및/또는 리컨디셔닝한 다음:

–블랭킹 사이클을 다시 실행하거나,

–적절한 완충용액의 새로운 분주를 사용하여 새 블랭크를 측정한 다음, 알려지지 않은 샘플의 새로운 분주를 측정합니다.

대부분의 애플리케이션에서는, 분석 대상 물질을 재현탁하는 데 사용한 것과 동일한 완충용액을 이용하여 블랭킹합니다. 기준(블랭킹)용액은 분석 물질 용액과 유사한 pH와 이온 강도를 가져야 합니다.