계산

핵산 애플리케이션은 샘플 농도를 계산하기 위해 소광계수와 경로 길이가 결합되어 "인자(factor)"라고 불리는 Beer-Lambert 방정식의 수정된 버전(오른쪽에 표시됨)을 사용합니다. |  | 소광 계수 대 인자 Beer-Lambert 방정식에 따른 용어를 사용할 때, 인자(f)는 다음과 같이 정의됩니다. 인자(f) = 1/(e * b) 여기에서: e = 파장에 따라 달라지는 몰 흡광 계수(단위: ng·cm/µL) b = 샘플의 경로길이(단위: cm) 결과적으로, 분석 물질 농도(c)는 다음과 같이 계산됩니다. c = A * [1/(e * b)] 또는 c = A * f 여기에서: c = 분석 물질 농도(단위: ng/µL) A = 흡광도(흡광도 단위: A) f = 인자(ng-cm/µL)(아래 참조)
dsDNA , ssDNA 및 RNA 애플리케이션의 경우, 일반적으로 인정되는 핵산의 인자가 Beer의 법칙과 함께 사용되어 샘플 농도를 계산합니다. 맞춤형 인자 애플리케이션의 경우, 사용자가 지정한 인자를 사용합니다. |  | 사용되는 인자 •dsDNA (인자 = 50 ng-cm/µL) •ssDNA (인자 = 33 ng-cm/µL) •RNA (인자 = 40 ng-cm/µL) •맞춤형 인자(15 ng-cm/µL와 150 ng-cm/µL 사이의 사용자 입력 인자)
계산된 핵산 농도는 260 nm에서의 흡광도 값, 사용된 인자 및 샘플 경로 길이를 기반으로 합니다. 단일 지점 기준선 교정(또는 분석 교정)도 적용될 수 있습니다. 농도는 질량 단위로 보고됩니다. 샘플 시퀀스를 기반으로 질량 농도를 몰 농도로 변환할 수 있는 계산기를 인터넷에서 이용할 수 있습니다. 260 nm, 280 nm 및 때로는 230 nm에서의 흡광도 값은 측정된 핵산 샘플의 순도 비율을 계산하는 데 사용됩니다. 순도 비율은 샘플 내 잔류 용매나 정제 과정에서 사용된 시약과 같은 오염 물질에 민감합니다. |  | 측정된 값 참고: 마이크로 부피 흡광도 측정 및 비표준(10 mm 이외의) 큐벳으로 수행된 측정의 경우, 스펙트럼은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다. A260 흡광도 •핵산 흡광도 값은 260 nm 정규화된 스펙트럼을 사용하여 측정됩니다. 기준선 교정이 선택되지 않은 경우 이 값이 보고되는 A260 값입니다. •기준선 교정이 선택된 경우, 교정 파장에서의 흡광도 값은 260 nm에서의 흡광도에서 차감됩니다. 교정된 260 nm 흡광도 값이 보고되며, 이는 핵산 농도 계산에 사용됩니다. A230 및 A280 흡광도 •정규화 및 기준선 교정된(선택된 경우) 흡광도 값(230 nm 및 280 nm에서)은 A260/A230 및 A260/A280 비율을 계산하는 데 사용됩니다.
|  | 샘플 경로 길이 •마이크로 부피 측정의 경우, 소프트웨어는 분석 파장에서 샘플 흡광도를 기반으로 최적의 경로 길이(1.0 mm에서 0.03 mm 사이)를 선택합니다. •큐벳 측정의 경우, 큐벳 모드로 전환한 후 선택된 경로 길이가 사용됩니다. (큐벳 설정 참조) •표시된 스펙트럼 및 흡광도 값은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다.
|  | 보고된 값 •핵산 농도. 선택된 단위(즉, ng/µL, µg/uL 또는 µg/mL)로 보고됩니다. 계산은 교정된 핵산 흡광도 값을 사용하여 수정된 Beer의 법칙 방정식을 기반으로 합니다. •A260/A280 순도 비율. 260nm에서의 교정된 흡광도 대비 280nm에서의 교정된 흡광도의 비율. A260/A280 비율이 DNA의 경우 ~1.8(RNA는 ~2.0)이면 일반적으로 "순수"하다고 간주됩니다. 산성 용액에서는 보고값이 0.2~0.3 낮게 나타날 수 있으며, 염기성 용액에서는 그 반대입니다. •A260/A230 순도 비율. 260nm에서의 교정된 흡광도 대비 230nm에서의 교정된 흡광도의 비율. A260/A230 비율이 DNA의 경우 1.8에서 2.2 사이라면 일반적으로 "순수"하다고 간주됩니다. 참고: 순도 비율은 샘플 품질의 중요한 지표이지만, 품질의 가장 좋은 지표는 관심 있는 다운스트림 애플리케이션에서의 기능성입니다(예: 실시간 PCR). •인자. Beer의 법칙과 함께 사용하여 샘플 농도를 계산합니다. •오염 물질 - Acclaro 소프트웨어에 의해 오염물이 식별된 경우, 오염 물질이 이 열에 표시됩니다. •인자. Beer의 법칙과 함께 사용하여 샘플 농도를 계산합니다. •기준선 교정. 기준선 교정을 위해 선택된 파장 및 해당 파장에서 검출된 흡광도. •위치. 측정이 받침대 또는 큐벳 모드에서 수행되었음을 표시합니다. •모니터링된 파장. 보고서에 포함하고자 하는 흡광도 값을 가진 추가 파장을 입력합니다.
|  | •오염 물질. Acclaro 소프트웨어에 의해 오염물이 식별된 경우, 오염 물질이 이 열에 표시됩니다. •교정. 사용 가능한 경우, Acclaro 소프트웨어를 사용하여 결정한 교정된 분석 물질의 농도를 표시합니다. •종. Acclaro 소프트웨어에 의해 검출된 핵산 오염 물질의 종. •키트명. 설정 중에 선택된 경우, qPCR 레시피 계산을 결정하는 데 사용된 qPCR 키트의 이름. •샘플 희석비. qPCR 전에 샘플의 희석이 권장될 때, 최종 희석 부피에 대한 측정된 샘플의 부피를 표시합니다. •희석 필요: 희석제 부피(µL). qPCR 전에 샘플의 희석이 권장될 때, 희석 튜브에 추가할 원본 핵산 샘플의 부피를 표시합니다. •희석 필요: 희석제 부피(µL). qPCR 전에 샘플의 희석이 권장될 때, 희석 튜브에 추가할 희석제의 부피를 표시합니다. •키트 반응: 핵산 부피(µL). 희석 필요 필드에서 희석이 권장되지 않는 경우, 이는 qPCR 반응 튜브에 추가해야 할 원본 핵산 샘플의 부피를 나타냅니다. 희석 필요 필드에서 희석이 권장되는 경우, 이는 qPCR 반응 튜브에 추가해야 할 희석 튜브의 부피를 나타냅니다. •키트 반응: 수분량(µL). qPCR 반응 튜브에 추가할 수분량을 표시합니다. •키트 반응: 최종 템플릿 농도. 핵산 샘플이 qPCR 반응 튜브에 추가된 후의 농도를 표시합니다.
|  | •교반기. 큐벳 모델에서 교반 기능이 사용되지 않을 때 "Off"가 표시됩니다. 교반 기능이 사용될 때, 교반 속도가 표시됩니다. •히터. 측정 중에 큐벳 포트가 가열되었는지 여부를 보여주기 위해 "Off" 또는 "On"이 표시됩니다. •측정 온도. 측정 중 큐벳포트의 온도가 표시됩니다. •목표 온도. 큐벳 포트의 희망 온도가 표시됩니다.