계산

다른 단백질 애플리케이션과 마찬가지로, 단백질 및 라벨 애플리케이션은 샘플의 소광 계수와 경로 길이를 기반으로 흡광도와 농도를 연관시키기 위해 Beer-Lambert 방정식을 사용합니다. 이 애플리케이션은 각 측정 샘플의 적절한 소광 계수를 선택할 수 있는 6개의 옵션 (오른쪽에 표시됨)을 제공하며, 이는 Beer의 방정식과 함께 사용되어 샘플 농도를 계산합니다. 샘플의 소광 계수가 알려져 있는 경우, e + MW(몰) 또는 e1%(질량) 옵션을 선택하고 해당 값을 입력하십시오. 그렇지 않다면 몰 소광 계수를 계산하거나, 샘플 용액에 가장 적합한 옵션을 선택하십시오. 팁: 이상적으로 소광 계수는 동일한 완충용액을 사용하여 알려진 농도의 분석 대상 단백질 용액을 이용하여 경험적으로 결정되어야 합니다. |  | 소광 계수에 대한 사용 가능한 옵션 •1 Abs = 1 mg/mL, 샘플 유형 및/또는 소광 계수를 알 수 없는 경우(단백질 농도의 대략적인 추정치 산출) •BSA(우혈청알부민, 6.7 L/gm-cm) •IgG(모든 포유류 항체, 13.7 L/gm-cm) •리소자임(난백 리소자임, 26.4 L/gm-cm) •기타 단백질 (e + MW): 사용자 지정 몰 소광 계수 •기타 단백질 (e1%) 사용자 지정 질량 소광 계수 참고: 자세한 내용은 Sample Type(샘플 유형)을 참조하십 시오.
계산된 단백질 농도는 280 nm에서의 흡광도 값, 선택된(또는 입력된) 소광 계수 및 샘플 경로 길이를 기반으로 합니다. 단일 지점 기준선 교정(또는 분석 교정)이 적용될 수 있습니다. 농도는 질량 단위로 보고됩니다. 샘플 시퀀스를 기반으로 질량 농도를 몰 농도로 변환할 수 있는 계산기를 인터넷에서 이용할 수 있습니다. |  | 측정된 값 A280 흡광도 참고: 스펙트럼의 모든 파장에서 850 nm에서의 흡광도 값이 차감됩니다. 그 결과, 표시된 스펙트럼에서 850 nm에서의 흡광도는 0입니다. 또한, 마이크로 부피 흡광도 측정 및 비표준(10 mm 이외의) 큐벳으로 수행된 측정의 경우, 스펙트럼은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다. •단백질 흡광도 값은 850 nm에서 교정되고, 정규화된 스펙트럼을 사용하여 280 nm에서 측정됩니다. 기준선 교정 및 염료 교정이 선택되지 않은 경우, 표시되는 A280 값이 그대로 보고되며, 해당 값이 단백질 농도 계산에 사용됩니다. •분석 교정이 선택된 경우, 850 nm 교정, 정규화 및 분석 교정된 280 nm에서의 흡광도 값이 보고되며, 이는 단백질 농도를 계산하는 데 사용됩니다. •염료가 사용된 경우, 850 nm 교정, 정규화,분석 교정 및 염료 교정된 280 nm에서의 흡광도 값이 보고되며, 이는 단백질 농도를 계산하는 데 사용됩니다.
염료 농도는 염료의 분석 파장에서의 흡광도 값, 염료의 소광 계수, 샘플의 경로 길이를 기준으로 계산됩니다. 경사선 염료 교정도 적용될 수 있습니다. |  | 염료 흡광도 •염료 흡광도 값은 특정 파장에서 측정됩니다. 분석에 사용되는 파장에 대해서는 Dye/Chromophore Editor(염료/발색단 편집기)를 참조하십시오. •Sloping Dye Correction을 선택한 경우, 400 nm에서 850 nm 사이에 선형 기준선이 그려지고, 각 염료의 분석 파장에서의 흡광도 값에서 해당 경사선의 흡광도 값을 차감합니다. 교정된 기준선 염료 흡광도 값이 보고되고, 이는 염료 농도 계산에 사용됩니다. 염료 교정 •사전 정의된 염료는 A260 및 A280에 대한 알려진 교정값을 가지고 있습니다. 사용된 교정값에 대해서는 Dye/Chromophore Editor(염료/발색단 편집기)를 참조하십시오. •A280 염료 교정은 단백질 농도 계산에 사용되는 A280 흡광도 값에서 차감됩니다.
|  | 샘플 경로 길이 •마이크로 부피 측정의 경우, 소프트웨어는 분석 파장에서 샘플 흡광도를 기반으로 최적의 경로 길이(1.0 mm에서 0.03 mm 사이)를 선택합니다. •큐벳 측정의 경우, 큐벳 모드로 전환한 후 선택된 경로 길이가 사용됩니다(큐벳 설정 참조). •표시된 스펙트럼 및 흡광도 값은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다.
|  | 보고된 값 •위치. 측정이 받침대에서 수행되었는지 여부를 표시합니다. •모니터링된 파장. 보고서에 포함하고자 하는 흡광도 값을 가진 추가 파장을 입력합니다. •단백질 농도 선택된 단위 (mg/mL 또는 µg/mL)로 보고됩니다. 계산은 교정된 단백질 흡광도 값을 사용하는 Beer-Lambert 방정식을 기반으로 합니다. •염료 1/염료 2 농도. pmol/µL 단위로 보고됩니다. 계산은 (경사진) 기준선 교정된 염료 흡광도 값을 사용하여 Beer의 법칙 방정식에 따라 수행됩니다. •염료 1/염료 2 라벨 정도. 접합체 분자당 평균 형광체 분자 수를 지정합니다. •교반기. 큐벳 모델에서 교반 기능이 사용되지 않을 때 "Off"가 표시됩니다. 교반 기능이 사용될 때, 교반 속도가 표시됩니다. •히터. 측정 중에 큐벳 포트가 가열되었는지 여부를 보여주기 위해 "Off" 또는 "On"이 표시됩니다. •측정 온도. 측정 중 큐벳포트의 온도가 표시됩니다. •목표 온도. 큐벳 포트의 희망 온도가 표시됩니다.

관련 주제

•Beer-Lambert 방정식

•A280 단백질 계산