Pierce 660 단백질

정제되지 않은 단백질 샘플의 총 단백질 농도를 독자적인 비색 검출 시약을 사용하여 측정합니다. Pierce 660 단백질 측정 보고된 결과 설정 검출 한계 |

Pierce 660 단백질 어세이의 이론

Pierce 660 단백질 어세이는 산성 조건에서 단백질에 독자적인 염료-금속 복합체가 결합하여 염료의 최대 흡수 파장이 이동하는 것에 기반하며, 이는 660 nm에서 측정됩니다. 염료-금속 복합체는 적갈색이며 단백질 결합 시 녹색으로 변합니다. 색상 변화는 낮은 pH에서 염료의 탈양성자화에 의해 발생하며, 단백질 내 양전하를 띤 아미노산 그룹과의 상호작용에 의해 촉진됩니다. 해당 염료는 주로 히스티딘, 아르기닌 및 리신과 같은 단백질의 염기성 잔기와 상호작용하며, 타이로신, 트립토판 및 페닐알라닌과는 일부 상호작용합니다. 반응 생성물은 660 nm에서 측정되며, 750 nm에서의 흡광도 값을 사용하여 기준선이 교정됩니다.

어세이에서 생성된 색상은 안정적이며, 단백질 농도가 넓은 범위에서 증가함에 따라 비례적으로 강해집니다. 이온성 세제 호환성 시약(IDCR)을 어세이 시약에 선택적으로 추가하여 브로모페놀 블루가 포함된 Laemmli SDS 샘플 완충용액을 포함한 다량의 이온성 세제와의 호환성을 높일 수 있습니다. IDCR은 충분히 혼합하면 완전히 용해되며 어세이에는 영향을 미치지 않습니다. 미리 제조된 단백질 결합 물질 키트는 당사 또는 현지 유통업체를 통해 구매할 수 있습니다. IDCR에 대한 자세한 정보는 키트 제조업체를 참조하시기 바랍니다.

단백질 어세이 키트 및 프로토콜

NanoDrop Ultra 기기에 대한 최신 키트와 프로토콜은 NanoDrop 웹사이트를 참조하십시오. 모든 표준 물질 및 샘플(알려지지 않은 샘플)에 대해서는 어세이 키트 제조업체의 권장 사항을 따르십시오. 어세이 과정 전반에 걸쳐 각 샘플이 동일한 시간과 온도에 노출되도록 하십시오.

표준 곡선을 생성하기 위한 단백질 표준 물질은 키트 제조업체에서도 제공할 수 있습니다. NanoDrop Ultra 받침대는 기존의 큐벳 기반 분광 광도계보다 더 높은 단백질 농도를 측정할 수 있으므로, 제조업체가 제공하는 것보다 더 높은 농도의 단백질 표준 물질을 직접 준비해야 할 수도 있습니다. 예를 들어, 표준 곡선이 어세이의 동적 범위와 미지 샘플의 예상 범위를 포함하도록 보장하기 위한 추가적인 표준 물질이 필요할 수 있습니다.

Pierce 단백질 표준 곡선

비색 단백질 분석에는 표준 곡선이 필요합니다.

•각 실험마다 표준 곡선이 요구됩니다. 애플리케이션 설정 화면에서 Setup standards(표준 설정) 옵션을 선택하여 새로운 표준 곡선을 실행하거나, Load Standards(표준 불러오기)를 선택하여 이전에 실행한 실험에서 표준 곡선을 불러올 수 있습니다.

자세한 내용은 표준 곡선 작업을 참조하십시오.