계산

A280 단백질 Pro 애플리케이션은 흡광도와 농도를 연관시키는 데 Beer-Lambert 방정식을 사용합니다. Beer 법칙을 농도에 대해 정리하면 오른쪽의 방정식이 도출됩 니다. |  | Beer-Lambert 방정식(농도 계산 형태) c = A / (e * b) 여기에서: A = UV 흡광도(흡광도 단위: A) e = 파장에 의존하는 몰 흡광 계수(또는 소광 계수)(단위: liter/mol-cm) b =경로 길이(단위: cm) c = 분석 물질 농도(단위: moles/liter 또는 몰농도(M)) 참고: 샘플 용액의 측정된 흡광도를 몰 소광 계수로 나누면 샘플의 몰 농도가 계산됩니다. 몰 농도 대 질량 농도 값에 관한 더 많은 정보는 공개된 소광 계수를 참조하십시오.
펩타이드나 단백질의 소광 계수는 트립토판(W), 티로신(Y) 및 시스테인(C)의 아미노산 조성과 관련이 있습니다. 팁: 소광 계수는 각 단백질에 대해 파장 특이적이며 완충요액 유형, 이온 강도 및 pH에 영향을 받을 수 있습니다. |  | 단백질에 대한 소광 계수 280 nm에서의 소광 계수는 아래 방정식에서 설명한 바와 같이, 세 가지 구성의 아미노산 280 nm 몰 소광 계수를 가중합하여 근사적으로 계산됩니다, e = (nW * 5500) + (nY * 1490) + (nC * 125) 조건: e = 몰 소광 계수 n = 각 아미노산의 잔기수 5500, 1490 및 125 = 280 nm에서의 아미노산 몰 흡광도
이 애플리케이션은 각 측정 샘플의 적절한 소광 계수를 선택할 수 있는 6개의 옵션(오른쪽에 표시됨)을 제공하며, 이는 Beer의 방정식과 함께 사용되어 샘플 농도를 계산합니다. 샘플의 소광 계수가 알려져 있는 경우, e + MW(몰) 또는 e1%(질량) 옵션을 선택하고 해당 값을 입력하십시오. 그렇지 않다면 몰 소광 계수를 계산하거나, 샘플 용액에 가장 적합한 옵션을 선택하십시오. 팁: 이상적으로 소광 계수는 동일한 완충용액을 사용하여 알려진 농도의 분석 대상 단백질 용액을 이용하여 경험적으로 결정되어야 합니다. |  | 소광 계수에 대한 사용 가능한 옵션 •1 Abs = 1 mg/mL, 샘플 유형 및/또는 소광 계수를 알 수 없는 경우(단백질 농도의 대략적인 추정치 산출) •BSA(우혈청알부민, 6.7 L/gm-cm) •IgG(모든 포유류 항체, 13.7 L/gm-cm) •리소자임(난백 리소자임, 26.4 L/gm-cm) •기타 단백질 (e + MW): 사용자 지정 몰 소광 계수 •기타 단백질 (e1%) 사용자 지정 질량 소광 계수 참고: 자세한 내용은 Sample Type(샘플 유형)을 참조하십 시오.

대부분의 문헌에서는 280 nm 또는 그 부근에서, 인산염 또는 다른 생리학적 완충용액 내에서 측정한 단백질의 소광 계수를 보고합니다. 이러한 값은 일상적인 단백질 농도 평가에 충분한 정확도를 제공합니다. |  | 공개된 소광 계수 단백질에 대한 공개된 소광 계수는 다음과 같은 형식으로 보고될 수 있습니다. •파장 의존적 몰 흡광(또는 소광) 계수(e): 단위는 M-1cm-1 •1% 용액 기준 소광 계수 (e1%): 단위는 (g/100 mL)-1cm-1 (즉, 1% 또는 1 g/100 mL 용액을 1 cm 큐벳에서 측정) •0.1%(즉, 1 mg/mL) 용액에 대한 단백질 흡광도 값 팁: 공개된 값을 평가할 때, 단위가 정확히 적용되었는지 반드시 확인하십시오.
오른쪽 방정식은 몰 소광 계수(emolar)와 퍼센트 소광 계수(e1%) 사이의 관계를 보여줍니다. |  | emolar과 e 1% 간의 변환 (emolar) * 10 = (e1%) * (MWprotein) 예시: 몰 소광 계수가 43,824 M-1cm-1이고 분자량(MW)이 66,400 달톤(Da)인 단백질의 퍼센트 용액 흡광 계수(e1%)를 결정하려면 위의 공식을 다음과 같이 재배열하고 계산합 니다. e1% = (emolar * 10) / (MWprotein) e1% = (43,824 * 10) / 66,400 Da) e1% = 6.6 g/100 mL
샘플의 농도(c)를 mg/mL로 결정하려면, 오른쪽의 방정식과 10의 변환 인자를 사용하십시오. 팁: NanoDrop Ultra 소프트웨어는 단백질 농도를 보고할 때 변환 인자를 적용합니다. |  | g/100 mL과 mg/mL 사이의 변환 Cprotein(단위: mg/mL) = (A / e1%) * 10 예시: 280 nm에서 기준에 대한 샘플의 측정 흡광도(A)가 5.8인 경우, 단백질 농도는 다음과 같이 계산할 수 있습니다. Cprotein = (A / e1%) * 10 Cprotein = (5.8/6.6 g/100 mL) * 10 Cprotein = 8.79 mg/mL

계산된 단백질 농도는 280 nm에서의 흡광도 값, 선택된(또는 입력된) 소광 계수 및 샘플 경로 길이를 기반으로 합니다. 단일 지점 기준선 교정(또는 분석 교정)이 적용될 수 있습니다. 농도는 질량 단위로 보고됩니다. 샘플 시퀀스를 기반으로 질량 농도를 몰 농도로 변환할 수 있는 계산기를 인터넷에서 이용할 수 있습니다. 260 nm 및 280 nm 흡광도 값은 측정된 단백질 샘플의 순도 비율을 계산하는 데 사용됩니다. 순도 비율은 샘플 내 잔류 용매나 정제 과정에서 사용된 시약과 같은 오염 물질에 민감합니다. |  | 측정된 값 A280 흡광도 참고: 마이크로 부피 흡광도 측정의 경우, 스펙트럼은 10 mm 경로 길이에 상응하도록 정규화됩니다. •단백질 흡광도 값은 280 nm 정규화된 스펙트럼을 사용하여 측정됩니다. 기준선 교정이 지정되지 않은 경우, 표시되는 A280 값이 그대로 보고되며, 해당 값이 단백질 농도 계산에 사용됩니다. •기준선 보정이 선택되면, 280 nm에서 정규화되고 기준선 보정이 적용된 흡광도가 보고되며, 이 값은 단백질 농도를 계산하는 데 사용됩니다. A260 흡광도 •정규화 및 기준선 교정된(선택된 경우) 260 nm에서의 흡광도 값은 A260/A280 비율을 계산하는 데 사용됩니다.
|  | 보고된 값 •단백질 농도. 선택된 단위(mg/mL 또는 µg/mL)로 보고됩니다. 계산은 교정된 단백질 흡광도 값을 사용하는 Beer-Lambert 방정식을 기반으로 합니다. •A260/A280 순도 비율. 260nm에서의 교정된 흡광도 대비 280nm에서의 교정된 흡광도의 비율입니다. A260/A280 비율이 단백질의 경우 ~0.57이면 일반적으로 "순수"하다고 간주됩니다. 참고: 순도 비율은 샘플 품질의 중요한 지표이지만, 품질의 가장 좋은 지표는 관심 있는 다운스트림 응용에서의 기능성입니다(예: 실시간 PCR). •샘플 유형. 이는 Beer의 법칙과 함께 사용하여 샘플 농도를 계산하는 데 사용되는 소광 계수를 결정합니다. •R2 (280nm). 280 nm 측정에 대한 최적 적합선의 결정 계수입니다. •기준선 교정. 기준선 교정을 위해 선택된 파장 및 해당 파장에서 검출된 흡광도. •위치. 측정이 받침대에서 수행되었음을 표시합니다. •모니터링된 파장. 보고서에 포함하고자 하는 흡광도 값을 가진 추가 파장을 입력합니다. •질량 소광 계수(1% 용액). •몰 소광 계수. •분자량.