마이크로 부피 샘플링—작동 원리

표면 장력 흡광도 스펙트럼 샘플 흡광도 샘플 농도 기준선 교정 샘플 형광 형광 샘플 농도 |

| 표면 장력 NanoDrop Ultra 분광 광도계 및 형광 측정기는 두 받침대 사이에 소량의 샘플을 표면 장력으로 유지합니다. 특허 받은 샘플 보존 시스템은 희석 없이 고농도 샘플의 측정을 가능하게 합니다. 상부 받침대에 내장된 광섬유 케이블은 제논 광원으로 연결됩니다. 하부 받침대에 내장된 두 번째 케이블은 검출기로 연결됩니다. 기기 암이 내려가면 샘플은 액체 기둥을 형성하며 기본적으로 두 광섬유 케이블 사이를 연결합니다.
| 흡광도 스펙트럼 빛은 액체 기둥을 통해 검출기로 통과하며, 이는 파장 대비 흡광도 스펙트럼을 생성합니다. 이 스펙트럼은 각 측정된 파장에서 샘플의 분자에 의해 흡수된 빛의 양을 보여줍니다. 참고: 증발은 측정 정확도에 영향을 주므로, 샘플 또는 블랭크를 로딩한 직후에는 암을 빠르게 닫으십시오. 왼쪽의 예시는 핵산 샘플에 대해 측정된 일반적인 흡광도 스펙트럼을 보여줍니다. 스펙트럼은 190 nm~850 nm까지 측정됩니다. 표시된 범위는 각 애플리케이션에 따라 다를 수 있습니다.
| 샘플 흡광도 기기가 블랭크될 때, 블랭킹 용액의 기준 스펙트럼이 측정되어 메모리에 저장됩니다. 각 샘플 측정에 대해, 샘플 강도와 블랭크 강도가 함께 사용되어 왼쪽의 방정식에 따라 샘플의 총 흡광도를 계산합니다.
Beer-Lambert 방정식 여기에서: A = 흡광도(흡광도 단위: A) e = 파장에 의존하는 몰 흡광 계수(또는 소광 계수) (단위: liter/mol-cm) b = 경로 길이(단위: cm) c = 분석 물질 농도(단위: moles/liter 또는 몰농도(M)) | 샘플 농도 왼쪽에 표시된 Beer-Lambert 방정식(Beer의 법칙)은 샘플 흡광도와 농도간의 상관관계를 설명하는 데 사용됩니다. 경로 길이는 두 받침대 사이의 거리로, 각 측정 중 실시간으로 변합니다. 이 자동 범위 조정 경로 길이 기술은 넓은 동적 범위에서 정확한 농도 결과를 생성합니다.
| 기준선 교정 일부 애플리케이션의 경우, 샘플내 빛 산란 입자에 의한 오프셋을 최소화하기 위해 각 측정에 기준선 보정을 적용하도록 기기를 설정할 수 있습니다. 이 교정은 기준 파장에서의 0에 가까운 흡광도 값을 스펙트럼 전반의 각 파장에서의 흡광도 값에서 차감하여, 해당 기준 파장에서 스펙트럼을 0 흡광도 단위로 "고정"시킵니다.
| 샘플 상대 형광 적색 또는 청색 LED가 광원으로 사용되며, 빛은 여기 필터, 액체 기둥을 통과하여 검출기에 도달하고, 검출기는 형광 신호 세기를 기록합니다. 그런 다음 이는 상대 형광 단위로 변환됩니다.
| 형광 샘플 농도 최소 두 개의 표준 물질을 필요로 하는 곡선 피팅 알고리즘이 농도 데이터 계산에 사용됩니다. NanoDrop Ultra dsDNA BR 및 RNA BR 형광 어세이는 모두 수정된 Hill 플롯을 사용합니다.