Measure OD600 (Pomiar OD600)

Funkcja OD600 służy do monitorowania tempa wzrostu bakterii lub innych kultur komórek drobnoustrojów poprzez pomiar gęstości optycznej (absorbancji) kultury w pożywce wzrostowej przy 600 nm. Równanie Lamberta-Beera i wprowadzony przez użytkownika współczynnik konwersji są wykorzystywane do korelacji absorbancji ze stężeniem. Raportowane wartości stężeń można wykorzystać do identyfikacji fazy populacji hodowanych komórek, np. logarytmicznej lub wykładniczej i stacjonarnej.

Funkcja OD600 podaje stężenie komórek w jednostce komórek/ml. Można również zastosować jednopunktową korektę absorbancji. Funkcja nie wymaga zastosowania krzywej wzorcowej.

Przed rozpoczęciem pracy...

Przed rozpoczęciem pomiarów za pomocą instrumentu NanoDrop Ultra należy podnieść ramię i wyczyścić górną i dolną podstawę. Należy przynajmniej przetrzeć podstawy nową ściereczką laboratoryjną. Więcej informacji znajduje się w punkcie Czyszczenie podstaw.

Uwaga Ze względu na ilość rozproszonego światła obecnego w tym teście, odczyty absorbancji są zazwyczaj bardzo niskie.

UWAGA • Nie należy spryskiwać instrumentu bezpośrednio lub używać spryskiwacza w jego pobliżu, ponieważ płyny mogą przedostać się do jego wnętrza i spowodować trwałe uszkodzenia. • Nie należy używać kwasu fluorowodorowego na podstawach. Jony fluorkowe trwale uszkadzają przewody światłowodowe wykonane z włókna kwarcowego.

Procedura

1. Na ekranie głównym należy wybrać zakładkę Więcej funkcji (More Apps),
a następnie OD600.

2. W razie potrzeby można zmienić setup options (opcje ustawień) i wybrać Save (Zapisz).

3. Jeśli używany jest model NanoDrop Ultrac lub NanoDrop Ultrac FL, należy wybrać odpowiednią ścieżkę pomiarową.

–W przypadku korzystania z kuwety należy wybrać opcję Cuvette (Kuweta) z rozwijanego menu w górnej części ekranu, co spowoduje wyświetlenie ustawień kuwety. Należy wybrać żądaną długość ścieżki, prędkość mieszania i ogrzewania, a następnie zamknąć rozwijane menu.

–Jeśli do pomiaru używana jest podstawa, należy pozostawić zaznaczone ustawienie Pedestal (Podstawa) w górnej części ekranu.

4. Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu do próby pustej (tj. roztworu pożywki, w której zawieszone są komórki będące przedmiotem zainteresowania) na dolną podstawę i opuścić ramię lub włożyć kuwetę do próby pustej w uchwyt kuwety.

Wskazówka: W przypadku korzystania z kuwety należy upewnić się, że ścieżka optyczna kuwety jest dopasowana do ścieżki optycznej instrumentu.

5. Wybrać opcję Blank (Próba pusta) i poczekać na zakończenie pomiaru.

Wskazówka: Jeśli opcja Auto-Blank (Automatyczna próba pusta) jest włączona, pomiar pusty rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia. (Opcja niedostępna dla pomiarów kuwetowych).

6. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką laboratoryjną lub wyjąć kuwetę do próby pustej.

7. Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu próbki na podstawę i opuścić ramię lub włożyć kuwetę z próbką w uchwyt kuwety.

8. Rozpocząć pomiar próbki:

–Podstawa: Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona, opuścić ramię; jeśli funkcja automatycznego pomiaru jest wyłączona, opuścić ramię i wybrać opcję Measure (Pomiar).

–Kuweta: Wybrać opcję Measure (Pomiar)

Po zakończeniu pomiaru próbki, wyświetlane jest widmo i raportowane wartości (patrz następny punkt).

9. Po zakończeniu pomiaru próbek, wybrać opcję End Experiment (Zakończ eksperyment).

10. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką lub wyjąć kuwetę z próbką.

Powiązane tematy

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Pomiar próbki przy użyciu kuwety

• Przygotowywanie próbek i prób pustych

• Podstawowa obsługa instrumentu