Pomiar białka A205

Funkcji Protein A205 należy używać do ilościowego oznaczania oczyszczonych peptydów i innych białek zawierających wiązania peptydowe, które wykazują absorbancję przy 205 nm. Ta funkcja raportuje stężenie białka i dwie wartości absorbancji (A205 i A280). Można również zastosować jednopunktową korektę sygnału bazowego. Funkcja nie wymaga zastosowania krzywej wzorcowej.

Przed rozpoczęciem pracy...

Przed rozpoczęciem pomiarów za pomocą instrumentu NanoDrop Ultra należy podnieść ramię i wyczyścić górną i dolną podstawę. Należy przynajmniej przetrzeć podstawy nową ściereczką laboratoryjną. Więcej informacji znajduje się w punkcie Czyszczenie podstaw.

Uwaga Jeśli próbki zawierają głównie aminokwasy – takie jak tryptofan lub tyrozyna – lub dwusiarczkowe wiązania cis-cis, należy użyć funkcji Białko A280 zamiast funkcji Białko A205.

UWAGA • Nie należy spryskiwać instrumentu bezpośrednio lub używać spryskiwacza w jego pobliżu, ponieważ płyny mogą przedostać się do jego wnętrza i spowodować trwałe uszkodzenia. • Nie należy używać kwasu fluorowodorowego na podstawach. Jony fluorkowe trwale uszkadzają przewody światłowodowe wykonane z włókna kwarcowego.

Procedura

1. Na ekranie głównym należy wybrać zakładkę Proteins (Białka), a następnie Protein A205 (Białko A205).

2. W razie potrzeby można zmienić setup options (opcje ustawień) i wybrać Save (Zapisz).

3. Jeśli używany jest model NanoDrop Ultrac lub NanoDrop Ultrac FL, należy wybrać odpowiednią ścieżkę pomiarową.

–W przypadku korzystania z kuwety należy wybrać opcję Cuvette (Kuweta) z rozwijanego menu w górnej części ekranu, co spowoduje wyświetlenie ustawień kuwety. Należy wybrać żądaną długość ścieżki, prędkość mieszania i ogrzewania, a następnie zamknąć rozwijane menu.

–Jeśli do pomiaru używana jest podstawa, należy pozostawić zaznaczone ustawienie Pedestal (Podstawa) w górnej części ekranu.

4. Odmierzyć pipetą 1–2 µl roztworu do próby pustej na dolną podstawę i opuścić ramię lub włożyć kuwetę do próby pustej w uchwyt kuwety.

Wskazówka: W przypadku korzystania z kuwety należy upewnić się, że ścieżka optyczna kuwety jest dopasowana do ścieżki optycznej instrumentu.

5. Wybrać opcję Blank (Próba pusta) i poczekać na zakończenie pomiaru.

Wskazówka: Jeśli opcja Auto-Blank (Automatyczna próba pusta) jest włączona, pomiar pusty rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia. (Opcja niedostępna dla pomiarów kuwetowych).

6. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką laboratoryjną lub wyjąć kuwetę do próby pustej.

7. Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu próbki na podstawę i opuścić ramię lub włożyć kuwetę z próbką w uchwyt kuwety.

8. Rozpocząć pomiar próbki:

–Podstawa: Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona, opuścić ramię; jeśli funkcja automatycznego pomiaru jest wyłączona, opuścić ramię i wybrać opcję Measure (Pomiar).

–Kuweta: Wybrać opcję Measure (Pomiar).

Po zakończeniu pomiaru próbki, wyświetlane jest widmo i raportowane wartości (patrz następny punkt).

9. Po zakończeniu pomiaru próbek, wybrać opcję End Experiment (Zakończ eksperyment).

10. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką lub wyjąć kuwetę z próbką.

Powiązane tematy

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów białek

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Pomiar próbki przy użyciu kuwety

• Przygotowywanie próbek i prób pustych

• Podstawowa obsługa instrumentu