Białko Bradford

Mierzy całkowite stężenie białka w nieoczyszczonych próbkach białka przy użyciu kolorymetrycznego odczynnika Coomassie Blue. Pomiar białka Bradford Raportowanie wyników Ustawienia Granice wykrywalności |

Teoria testu Bradford dla białek

Test białek Bradford wykorzystuje indukowane przez białko przesunięcie absorbancji barwnika Coomassie Blue w celu określenia całkowitego stężenia białka. Kompleks białko-barwnik jest mierzony przy 595 nm i korygowany na podstawie sygnału bazowego przy użyciu wartości absorbancji przy 750 nm. Gotowe zestawy stabilizowanej mieszaniny odczynników zawierające barwnik Coomassie Blue, alkohol i środek powierzchniowo czynny są dostępne u nas lub u lokalnego dystrybutora.

Aby zmaksymalizować niezawodność testu białka Bradford:

• Należy pracować szybko i nie pozwalać, aby przygotowane wzorce lub próbki leżały dłużej niż to konieczne. Agregaty Coomassie barwnik-barwnik i barwnik-białko mogą tworzyć cząstki stałe wraz z biegem czasu ich wywoływania, powodując znaczne wahania odczytów absorbancji.

• Wzorce i próbki należy badać w trzech powtórzeniach, używając nowej porcji do każdego pomiaru. W przypadku pomiarów na podstawie, całkowity sygnał analitu (barwnik białkowy) przy 595 nm jest ograniczony do ~0–0,150 A ze względu na długość ścieżki podstawy wynoszącą 1,0 mm, stężenie barwnika Coomassie i kwasowe środowisko pH.

Uwaga W przypadku instrumentów NanoDrop UltraC oraz NanoDrop UltraC FL, użycie opcji kuwety spowoduje uzyskanie wyższego sygnału absorbancji.

Zestawy i protokoły do oznaczania białek

Aby uzyskać informacje na temat obecnie oferowanych zestawów i protokołów dla instrumentów NanoDrop Ultra, proszę zapoznać się ze stroną internetową NanoDrop. Należy postępować zgodnie z zaleceniami producenta zestawu testowego dla wszystkich wzorców i próbek (o nieznanych właściwościach). Należy upewnić się, że każda z nich jest testowana przez taki sam czas i w takiej samej temperaturze.

Wzorce białek do generowania krzywej wzorcowej mogą być również dostarczane przez producenta zestawu. Ponieważ podstawy NanoDrop Ultra mogą mierzyć wyższe stężenia białek niż tradycyjne spektrofotometry kuwetowe, konieczne może być użycie własnych wzorców białek o wyższych stężeniach niż dostarczone przez producenta. Na przykład, dodatkowe wzorce mogą być niezbędne, aby krzywa wzorcowa obejmowała odpowiedni zakres dynamiczny testu i zakres oczekiwany dla próbek o nieznanych właściwościach.

Krzywe wzorcowe białka Bradford

Do kolorymetrycznej analizy białek niezbędne jest utworzenie krzywej wzorcowej.

• Wymaga jej każdy eksperyment. Można stworzyć nową krzywą wzorcową, wybierając opcję Setup standards (Ustaw wzorce) lub zaimportować wzorzec z wcześniej przeprowadzonego eksperymentu, wybierając opcję Load standards (Wczytaj wzorce) na ekranie ustawień funkcji.

Więcej informacji można znaleźć w punkcie Praca z krzywymi wzorcowymi.