Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów kwasów nukleinowych

• Próbki kwasów nukleinowych należy odizolować i oczyścić przed pomiarem w celu usunięcia zanieczyszczeń. W zależności od próbki, zanieczyszczenia mogą obejmować DNA, RNA, wolne nukleotydy, białka, niektóre składniki buforu i barwniki. Więcej informacji można znaleźć w punkcie Przygotowywanie próbek.

Uwaga Odczynniki ekstrakcyjne, takie jak guanidyna, fenol i EDTA, zwiększają absorbancję między 230 nm a 280 nm i wpływają na wyniki pomiarów, jeśli są obecne w próbkach (nawet w ilościach szczątkowych).

• Należy upewnić się, że absorbancja próbki mieści się w granicach wykrywalności instrumentu.

• Próba pusta z tym samym roztworem buforowym użytym do ponownego zawieszenia analitu będącego przedmiotem zainteresowania. Roztwór do próby pustej powinien mieć podobne pH i siłę jonową jak roztwór analitu.

• Należy wykonać próbę pustą, aby ocenić wpływ absorbancji roztworu buforowego. Jeśli bufor wykazuje silną absorbancję przy lub w pobliżu długości fali analizy (zazwyczaj 260 nm), może być konieczne wybranie innego buforu lub funkcji. Więcej informacji można znaleźć w punkcie Wybór i pomiar próby pustej.

• W przypadku pomiarów mikroobjętości:

–Należy upewnić się, że powierzchnie podstaw są odpowiednio oczyszczone i przygotowane.

–Jeśli to możliwe, należy podgrzać próbki o wysokim stężeniu lub dużych cząsteczkach, takie jak próbki genomowe lub lambda DNA, do temperatury 63°C i delikatnie (ale dokładnie) odwirować przed wykonaniem pomiarów. Należy unikać wprowadzania pęcherzyków powietrza podczas mieszania i pobierania próbek.

–Należy postępować zgodnie z najlepszymi praktykami dotyczącymi pomiarów mikroobjętości.

–Należy użyć próbek o objętości 1−2 µl. Więcej informacji można znaleźć w punkcie Zalecane objętości próbek.

• W przypadku pomiarów z użyciem kuwet (tylko instrumenty NanoDrop UltraC i NanoDrop UltraC FL ) należy używać kompatybilnych kuwet i przestrzegać najlepszych praktyk dotyczących pomiarów prowadzonych z użyciem kuwet.

Powiązane tematy

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Pomiar próbki przy użyciu kuwety

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów mikroobjętości

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów z użyciem kuwety

• Przygotowywanie próbek i prób pustych

• Podstawowa obsługa instrumentu