Pomiar próbek znakowanych fluoroforami

Funkcja Fluorometer służy do pomiaru fluorescencji emitowanej przez różne próbki, które zostały oznaczone fluoroforem. Funkcja działa podobnie do testu fluorescencji dsDNA i RNA, wykorzystując wygenerowaną krzywą wzorcową do określenia stężenia badanych próbek. Umożliwia ona korzystanie z dodatkowych testów poza testami fluorescencyjnymi NanoDrop Ultra BR.

Przed rozpoczęciem pracy...

Przed rozpoczęciem pomiarów za pomocą instrumentu NanoDrop Ultra należy podnieść ramię i wyczyścić górną i dolną podstawę. Należy przynajmniej przetrzeć podstawy nową ściereczką laboratoryjną. Więcej informacji znajduje się w punkcie Czyszczenie podstaw.

UWAGA • Nie należy spryskiwać instrumentu bezpośrednio lub używać spryskiwacza w jego pobliżu, ponieważ płyny mogą przedostać się do jego wnętrza i spowodować trwałe uszkodzenia. • Nie należy używać kwasu fluorowodorowego na podstawach. Jony fluorkowe trwale uszkadzają przewody światłowodowe wykonane z włókna kwarcowego.

Przygotowanie próbki i wzorca

Aby uzyskać instrukcje dotyczące przygotowania wzorców i próbek do testu, należy zapoznać się z instrukcjami dołączonymi do używanego testu.

Więcej informacji na temat opcji dostępnych podczas tworzenia krzywej wzorcowej można znaleźć w punkcie Praca z krzywymi wzorcowymi.

Pomiar wzorców i próbek znakowanych fluoroforami za pomocą fluorescencji

1. Na ekranie głównym należy wybrać zakładkę Fluorescence (Fluorescencja), a następnie Fluorometer (Fluorometr).

2. Należy wybrać jedną z opcji diody LED wzbudzenia (niebieska lub czerwona).

3. W razie potrzeby można zmienić setup options (opcje ustawień) i wybrać Save (Zapisz).

4. Należy zmierzyć wzorce:

a.Odmierzyć pipetą na dolną podstawę 2 µl przygotowanej probówki testowej zawierającej wzorzec i opuścić ramię. Próbka wzorcowa nie powinna zawierać żadnego analitu będącego przedmiotem testu.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest wyłączona , należy wybrać opcję Measure (Pomiar), aby go rozpocząć.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona , pomiar rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia.

Uwaga Do każdego pomiaru należy zawsze używać nowej próbki o objętości 2 µl.

b.Po zakończeniu pomiaru należy usunąć próbkę z górnej i dolnej podstawy za pomocą suchej ściereczki laboratoryjnej.

c.Jeśli ustawienie Replicates (Powtórzenia) jest większe niż 1, należy ponowić pomiary aż do ukończenia wszystkich powtórzeń.

–Należy powtórzyć powyższe podetapy dla wzorca nr 1 i wszystkich pozostałych wzorców, w tym dodatkowe ponowne pomiary.

–Po zmierzeniu wszystkich wzorców i wszystkich powtórzeń pojawi się komunikat z opcjami ponownego pomiaru wzorców lub rozpoczęcia pomiaru próbek.

–Po zakończeniu pomiaru wzorców należy wybrać opcję Measure Samples (Pomiar próbek).

5. Pomiar próbek:

a.Należy wprowadzić lub edytować identyfikator próbki w górnej części ekranu, zaznaczając pole i wprowadzając nową nazwę próbki.

b.Odmierzyć pipetą 2 µl z probówki zawierającej odpowiednią próbkę na dolną podstawę i opuścić ramię.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest wyłączona , należy wybrać opcję Measure (Pomiar), aby go rozpocząć.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona , pomiar rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia.

Uwaga Do każdego pomiaru należy zawsze używać nowej próbki o objętości 2 µl.

c.Po zakończeniu pomiaru próbki, wyświetlana jest krzywa wzorcowa i raportowane wartości (patrz następny punkt).

d.Po zakończeniu pomiaru należy usunąć próbkę z górnej i dolnej podstawy za pomocą suchej ściereczki laboratoryjnej.

e.Powtórzyć podetapy, aby zmierzyć wszystkie pozostałe próbki (postępując zgodnie z instrukcjami wyświetlanymi na ekranie).

f.Po zakończeniu pomiaru próbek, wybrać opcję End Experiment (Zakończ eksperyment).

6. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką.

Powiązane tematy

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów kwasów nukleinowych

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów mikroobjętości

• Podstawowa obsługa instrumentu