Pomiar białka Pierce 660

Test białka Pierce 660 wykorzystuje opatentowany materiał wiążący białko jako kolorymetryczny odczynnik do określania całkowitego stężenia białka w nieoczyszczonych próbkach. Funkcja ta jest przeznaczona dla roztworów białek, które zawierają wysokie stężenia detergentów, środków redukujących i innych powszechnie stosowanych odczynników. Funkcja Pierce 660 mierzy absorbancję przy 660 nm i wykorzystuje krzywą wzorcową do obliczenia stężenia białka (więcej informacji można znaleźć w punkcie Praca z krzywymi wzorcowymi Stosowana jest jednopunktowa korekta sygnału bazowego.

Przed rozpoczęciem pracy...

Przed rozpoczęciem pomiarów za pomocą instrumentu NanoDrop Ultra należy podnieść ramię i wyczyścić górną i dolną podstawę. Należy przynajmniej przetrzeć podstawy nową ściereczką laboratoryjną. Więcej informacji znajduje się w punkcie Czyszczenie podstaw.

UWAGA • Nie należy spryskiwać instrumentu bezpośrednio lub używać spryskiwacza w jego pobliżu, ponieważ płyny mogą przedostać się do jego wnętrza i spowodować trwałe uszkodzenia. • Nie należy używać kwasu fluorowodorowego na podstawach. Jony fluorkowe trwale uszkadzają przewody światłowodowe wykonane z włókna kwarcowego.

Procedura

1. Na ekranie głównym należy wybrać zakładkę Proteins (Białka), a następnie Protein Pierce 660 (Białko Pierce 660).

2. W razie potrzeby można zmienić setup options (opcje ustawień) i wybrać Save (Zapisz). (Należy określić typ krzywej i liczbę powtórzeń dla każdego wzorca oraz wprowadzić stężenie każdego wzorca.)

Wskazówka: Dla tego testu zalecane jest ustawienie opcji Curve Type (Typ krzywej) na „Linear (Liniowa)”.

3. Jeśli używany jest model NanoDrop Ultrac lub NanoDrop Ultrac FL, należy wybrać odpowiednią ścieżkę pomiarową.

–W przypadku korzystania z kuwety należy wybrać opcję Cuvette (Kuweta) z rozwijanego menu w górnej części ekranu, co spowoduje wyświetlenie ustawień kuwety. Należy wybrać żądaną długość ścieżki, prędkość mieszania i ogrzewania, a następnie zamknąć rozwijane menu.

–Jeśli do pomiaru używana jest podstawa, należy pozostawić zaznaczone ustawienie Pedestal (Podstawa) w górnej części ekranu.

4. Pomiar próby pustej:

–Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu referencyjnego na podstawę lub wstawić kuwetę referencyjną z roztworem do próby pustej (roztwór referencyjny nie powinien zawierać żadnego wzorca białka, patrz punkt Praca z krzywymi wzorcowymi w celu uzyskania szczegółowych informacji).

Wskazówka: W przypadku korzystania z kuwety należy upewnić się, że ścieżka optyczna kuwety jest dopasowana do ścieżki optycznej instrumentu.

–Wybrać opcję Blank (Próba pusta) i poczekać na zakończenie pomiaru.

Wskazówka: Jeśli opcja Auto-Measure (Automatyczny pomiar) jest włączona, pomiar wzorca rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia. (Opcja niedostępna dla pomiarów kuwetowych).

–Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką laboratoryjną lub wyjąć kuwetę.

5. Pomiar wzorca referencyjnego:

–Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu referencyjnego na podstawę lub wstawić kuwetę referencyjną (roztwór referencyjny nie powinien zawierać żadnego wzorca białka, patrz punkt Praca z krzywymi wzorcowymi w celu uzyskania szczegółowych informacji).

–Wybrać opcję Measure (Pomiar) i poczekać na jego zakończenie.

–Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką lub wyjąć kuwetę.

–Jeśli ustawienie Replicates (Powtórzenia) ma wartość większą niż 1, należy powtórzyć pomiar.

6. Pomiar pozostałych wzorców:

–Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu wzorca 1 na podstawę lub włożyć kuwetę z wzorcem 1.

–Wybrać opcję Measure (Pomiar) i poczekać na jego zakończenie.

–Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką lub wyjąć kuwetę.

–Jeśli ustawienie Replicates (Powtórzenia) ma wartość większą niż 1, należy powtórzyć pomiar.

–Należy powtórzyć powyższe kroki dla każdego dodatkowego wzorca (po zmierzeniu określonej liczby wzorców i powtórzeń pojawi się komunikat z pytaniem, czy ponownie zmierzyć wzorce, załadować więcej wzorców lub rozpocząć pomiar próbek).

–Po zakończeniu pomiaru wzorców należy wybrać opcję Measure Samples (Pomiar próbek) (Należy przesunąć palcem w lewo, aby wyświetlić krzywą wzorcową) w przypadku korzystania z lokalnego oprogramowania sterującego lub zakładkę Curve (Krzywa) w przypadku korzystania z oprogramowania sterującego na komputerze PC.

7. Pomiar próbek:

–Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu próbki 1 na podstawę lub włożyć kuwetę z próbką 1.

–Wybrać opcję Measure Samples (Pomiar próbek) i poczekać na jego zakończenie.

–Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką lub wyjąć kuwetę.

–Jeśli ustawienie Replicates (Powtórzenia) ma wartość większą niż 1, należy powtórzyć pomiar.

8. Po zakończeniu pomiaru próbek, wybrać opcję End Experiment (Zakończ eksperyment).

9. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką lub wyjąć kuwetę z próbką.

Powiązane tematy

• Praca z krzywymi wzorcowymi

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów białek

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Pomiar próbki przy użyciu kuwety

• Przygotowywanie próbek i prób pustych

• Podstawowa obsługa instrumentu