Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów białek

• Próbki białek należy odizolować i oczyścić przed pomiarem w celu usunięcia zanieczyszczeń. W zależności od próbki, zanieczyszczenia mogą obejmować DNA, RNA i niektóre składniki buforu. Więcej informacji można znaleźć w punkcie Przygotowywanie próbek.

Uwaga Odczynniki ekstrakcyjne, które zwiększają absorbancję między 200 nm a 280 nm wpływają na wyniki pomiarów, jeśli są obecne w próbkach (nawet w ilościach szczątkowych).

• Należy upewnić się, że absorbancja próbki mieści się w granicach wykrywalności instrumentu.

• Wybór próby pustej:

–W przypadku funkcji Białko A280 Pro, należy przeprowadzić próbę pustą z tym samym roztworem buforowym użytym do ponownego zawieszenia analitu będącego przedmiotem zainteresowania. Roztwór do próby pustej powinien mieć podobne pH i siłę jonową jak roztwór analitu.

• Należy wykonać próbę pustą, aby ocenić wpływ absorbancji roztworu buforowego. Jeśli bufor wykazuje silną absorbancję przy lub w pobliżu długości fali analizy (zazwyczaj 280 nm), konieczne może być wybranie innego buforu lub funkcji, takiej jak test kolorymetryczny (na przykład BCA lub Pierce 660). Więcej informacji można znaleźć w punkcie Wybór i pomiar próby pustej.

Uwaga Bufory takie jak Triton X, RIPA i NDSB przyczyniają się do znacznej absorbancji i nie są kompatybilne z bezpośrednimi pomiarami A280.

• W przypadku pomiarów mikroobjętości:

–Należy upewnić się, że powierzchnie podstaw są odpowiednio oczyszczone i przygotowane. (Białka mają tendencję do przyklejania się do powierzchni podstaw).

–Należy delikatnie (ale dokładnie) wymieszać próbki przed wykonaniem pomiaru. Należy unikać wprowadzania pęcherzyków powietrza podczas mieszania i pobierania próbek.

–Należy postępować zgodnie z najlepszymi praktykami dotyczącymi pomiarów mikroobjętości.

–Należy użyć próbek o objętości 2 µl. Więcej informacji można znaleźć w punkcie Zalecane objętości próbek.

Powiązane tematy

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów białek

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Przygotowywanie próbek i prób pustych

• Podstawowa obsługa instrumentu