Pomiar białka A280

Funkcji Białko A280 należy używać do ilościowego oznaczania oczyszczonych próbek białek, które zawierają aminokwasy takie jak tryptofan lub tyrozyna, lub dwusiarczkowe wiązania cis-cis, które wykazują absorbancję przy 280 nm. Ta funkcja raportuje stężenie białka mierzone przy 280 nm i jeden stosunek absorbancji (A260/A280). Można również zastosować jednopunktową korektę sygnału bazowego. Funkcja nie wymaga zastosowania krzywej wzorcowej.

Przed rozpoczęciem pracy...

Przed rozpoczęciem pomiarów za pomocą instrumentu NanoDrop Ultra należy podnieść ramię i wyczyścić górną i dolną podstawę. Należy przynajmniej przetrzeć podstawy nową ściereczką laboratoryjną. Więcej informacji znajduje się w punkcie Czyszczenie podstaw.

Uwaga Jeśli próbki zawierają głównie wiązania peptydowe i niewiele lub nie zawierają aminokwasów, należy użyć funkcji Protein A205 (Białko A205) zamiast Protein A280 (Białko A280).

UWAGA • Nie należy spryskiwać instrumentu bezpośrednio lub używać spryskiwacza w jego pobliżu, ponieważ płyny mogą przedostać się do jego wnętrza i spowodować trwałe uszkodzenia. • Nie należy używać kwasu fluorowodorowego na podstawach. Jony fluorkowe trwale uszkadzają przewody światłowodowe wykonane z włókna kwarcowego.

Procedura

1. Na ekranie głównym należy wybrać zakładkę Proteins (Białka), a następnie Protein A280 (Białko A280).

2. W razie potrzeby można zmienić setup options (opcje ustawień) i wybrać Save (Zapisz).

3. Jeśli używany jest model NanoDrop UltraC lub NanoDrop UltraC FL, należy wybrać odpowiednią ścieżkę pomiarową.

–W przypadku korzystania z kuwety należy wybrać opcję Cuvette (Kuweta) z rozwijanego menu w górnej części ekranu, co spowoduje wyświetlenie ustawień kuwety.
Należy wybrać żądaną długość ścieżki, prędkość mieszania i ogrzewania, a następnie zamknąć rozwijane menu.

–Jeśli do pomiaru używana jest podstawa, należy pozostawić zaznaczone ustawienie Pedestal (Podstawa) w górnej części ekranu.

4. Odmierzyć pipetą 1−2 µl roztworu do próby pustej na dolną podstawę i opuścić ramię lub włożyć kuwetę do próby pustej w uchwyt kuwety.

Wskazówka: W przypadku korzystania z kuwety należy upewnić się, że ścieżka optyczna kuwety jest dopasowana do ścieżki optycznej instrumentu.

5. Wybrać opcję Blank (Próba pusta) i poczekać na zakończenie pomiaru.

Wskazówka: Jeśli opcja Auto-Blank (Automatyczna próba pusta) jest włączona, pomiar pusty rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia. (Opcja niedostępna dla pomiarów kuwetowych).

6. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką laboratoryjną lub wyjąć kuwetę do próby pustej.

7. Odmierzyć pipetą 2 µl roztworu próbki na podstawę lub włożyć kuwetę z próbką w uchwyt kuwety.

8. Rozpocząć pomiar próbki:

–Podstawa: Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona, opuścić ramię; jeśli funkcja automatycznego pomiaru jest wyłączona, opuścić ramię i wybrać opcję Measure (Pomiar).

–Kuweta: Wybrać opcję Measure (Pomiar).

Po zakończeniu pomiaru próbki, wyświetlane jest widmo i raportowane wartości (patrz następny punkt).

9. Po zakończeniu pomiaru próbek, wybrać opcję End Experiment (Zakończ eksperyment).

10. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką lub wyjąć kuwetę z próbką.