Obliczenia

Podobnie jak w przypadku innych białek, funkcja Białko 205 wykorzystuje równanie Lamberta-Beera do korelacji absorbancji ze stężeniem w oparciu o współczynnik ekstynkcji próbki i długość ścieżki. Funkcja oferuje trzy opcje (pokazane po prawej stronie) wyboru odpowiedniego współczynnika ekstynkcji dla każdej mierzonej próbki, który będzie używany w połączeniu z prawem Beera do obliczenia stężenia próbki. Jeśli współczynnik ekstynkcji próbki jest znany, należy wybrać opcję e 1% (masa) i wprowadzić wartość. W przeciwnym razie należy obliczyć współczynnik ekstynkcji lub wybrać opcję, która najlepiej pasuje do danego roztworu próbki. Wskazówka: Najlepiej, jeśli współczynnik ekstynkcji zostanie określony empirycznie przy użyciu roztworu badanego białka o znanym stężeniu przy użyciu tego samego buforu. |  | Dostępne opcje współczynnika ekstynkcji • 31, zakłada że e0,1% (1 mg/ml) przy 205 nm = 31 • Scopes (Zakresy), zakłada że e0,1% (1 mg/ml) przy 205 nm = 27 + 120 * (A280/A205) • Other protein (Inne białko), należy podać masowy współczynnik ekstynkcji w l/gm-cm dla roztworu białka 1 mg/ml (e0,1%) Uwaga: Więcej informacji można znaleźć w punkcie Sample Type (Typ próbki). Mierzone wartości Absorbancja A205 Uwaga: W przypadku pomiarów absorbancji mikroobjętościowej oraz pomiarów wykonanych przy użyciu niestandardowych (innych niż 10 mm) kuwet, widma są znormalizowane do ekwiwalentu długości ścieżki 10 mm. • Wartości absorbancji białek są mierzone przy 205 nm z zastosowaniem znormalizowanego widma. Jeśli nie wybrano opcji Baseline Correction (Korekta sygnału bazowego), jest to raportowana wartość A205 i wartość używana do obliczenia stężenia białka. • Jeśli opcja Baseline Correction (Korekta sygnału bazowego) została wybrana, raportowana jest znormalizowana i skorygowana o sygnał bazowy wartość absorbancji przy 205 nm i używana jest ona do obliczenia stężenia białka. A280 absorbance (Absorbancja A280) • Raportowana jest również znormalizowana i skorygowana względem sygnału bazowego (jeśli wybrano) wartość absorbancji przy 280 nm.
Obliczone stężenia białek są oparte na wartości absorbancji przy 205 nm, wybranym (lub wprowadzonym) współczynniku ekstynkcji i długości ścieżki próbki. Można również zastosować jednopunktową korektę sygnału bazowego. Stężenie jest podawane w jednostkach masy. W Internecie dostępne są kalkulatory do przeliczania stężenia z masy na jednostki molowe w oparciu o sekwencję próbki. |
|  | Sample Pathlength (Długość ścieżki próbki) • W przypadku pomiarów mikroobjętości, oprogramowanie wybiera optymalną długość ścieżki (od 1,0 mm do 0,03 mm) na podstawie absorbancji próbki przy długości fali analizy. • W przypadku pomiarów kuwetowych wykorzystywana jest długość ścieżki wybrana po przełączeniu na tryb kuwety - patrz Cuvette Settings (Ustawienia kuwety). • Wyświetlane widma i wartości absorbancji są znormalizowane dla ekwiwalentu długości ścieżki 10 mm.
|  | Raportowane wartości • Protein concentration (Stężenie białka). Raportowane w wybranej jednostce (mg/ml lub µg/ml). Obliczenia oparte są na równaniu Lamberta-Beera przy użyciu skorygowanej wartości absorbancji białka. • Method (Metoda). Określa współczynnik ekstynkcji używany w połączeniu z prawem Beera do obliczania stężenia próbki. • Baseline correction (Korekta sygnału bazowego). Długość fali wybrana do korekty sygnału bazowego i absorbancja wykryta przy tej długości fali. • Location (Lokalizacja). Wyświetla, czy pomiar został wykonany w trybie podstawy czy kuwety. • Monitored wavelength (Monitorowana długość fali). Należy podać dodatkową długość fali, której wartość absorbancji ma zostać uwzględniona w raporcie. • Mass extinction coefficient (Masowy współczynnik ekstynkcji, roztwór 1%).
|  | • Stirrer (Mieszadło). „Off (Wyłączone)” będzie wyświetlane, gdy mieszadło nie jest używane w trybie pracy kuwetowej. Gdy używana jest funkcja mieszadła, wyświetlana jest prędkość mieszania. • Heater (Podgrzewacz). Wyświetlany będzie komunikat „Off (Wyłączone)” lub „On (Włączone)” wskazujący, czy port kuwety jest podgrzewany podczas pomiaru. • Measured Temperature (Temperatura zmierzona). Wyświetlona zostanie temperatura portu kuwety podczas pomiaru. • Target Temperature (Temperatura docelowa). Wyświetlona zostanie docelowa temperatura portu kuwety.