Pomiar Oligo DNA Pro lub Oligo RNA Pro

Funkcji Oligo DNA Pro i Oligo RNA Pro należy używać do ilościowego oznaczania oligonukleotydów, które absorbują przy 260 nm ze zwiększoną dokładnością przy wyższych stężeniach (>62,5 A). Molowe współczynniki ekstynkcji są obliczane automatycznie na podstawie zdefiniowanej przez użytkownika sekwencji bazowej próbki. Funkcje te raportują stężenie kwasu nukleinowego i dwa współczynniki absorbancji (A260/A280 i A260/A230). Można również zastosować jednopunktową korektę sygnału bazowego.

Przed rozpoczęciem pracy...

Przed rozpoczęciem pomiarów za pomocą instrumentu NanoDrop Ultra należy podnieść ramię i wyczyścić górną i dolną podstawę. Należy przynajmniej przetrzeć podstawy nową ściereczką laboratoryjną. Więcej informacji znajduje się w punkcie Czyszczenie podstaw.

Uwaga Jeśli oligonukleotyd został zmodyfikowany, na przykład barwnikiem fluoroforowym, należy skontaktować się z producentem oligonukleotydu, aby ustalić, czy modyfikacja przyczynia się do absorbancji przy 260 nm. Jeśli tak jest, zalecamy użycie funkcji Microarray (Mikromacierz) do ilościowego oznaczenia stężenia kwasu nukleinowego. Funkcja Microarray (Mikromacierz) zawiera korektę usuwającą z wyniku kwantyfikacji oligo jakikolwiek wpływ absorbancji spowodowany barwnikiem.

UWAGA • Nie należy spryskiwać instrumentu bezpośrednio lub używać spryskiwacza w jego pobliżu, ponieważ płyny mogą przedostać się do jego wnętrza i spowodować trwałe uszkodzenia. • Nie należy używać kwasu fluorowodorowego na podstawach. Jony fluorkowe trwale uszkadzają przewody światłowodowe wykonane z włókna kwarcowego.

Procedura

1. Na ekranie głównym należy wybrać zakładkę Acclaro Pro, a następnie Oligo DNA Pro lub Oligo RNA Pro, w zależności od potrzeb.

2. W razie potrzeby można zmienić setup options (opcje ustawień) i wybrać Save (Zapisz).

3. Odmierzyć pipetą 1−2 µl roztworu do próby pustej na dolną podstawę i opuścić ramię.

4. Wybrać opcję Blank (Próba pusta) i poczekać na zakończenie pomiaru.

Wskazówka: Jeśli opcja Auto-Blank (Automatyczna próba pusta) jest włączona, pomiar pusty rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia.

5. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką laboratoryjną.

6. Odmierzyć pipetą 1−2 µl roztworu próbki na podstawę.

7. Rozpocząć pomiar próbki:

–Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona, opuścić ramię; jeśli funkcja automatycznego pomiaru jest wyłączona, opuścić ramię i wybrać opcję Measure (Pomiar).

Po zakończeniu pomiaru próbki, wyświetlane jest widmo i raportowane wartości (patrz następny punkt).

8. Po zakończeniu pomiaru próbek, wybrać opcję End Experiment (Zakończ eksperyment).

9. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką.

Powiązane tematy

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów kwasów nukleinowych

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów mikroobjętości

• Przygotowywanie próbek i prób pustych

• Podstawowa obsługa instrumentu