Próbkowanie mikroobjętości — jak to działa

Napięcie powierzchniowe Widmo absorbancji Absorbancja próbki Stężenie próbki Korekta sygnału bazowego Fluorescencja próbki Stężenie próbki fluorescencyjnej |

| Napięcie powierzchniowe Spektrofotometry i fluorometry NanoDrop Ultra wykorzystują napięcie powierzchniowe do utrzymywania niewielkiej objętości próbki pomiędzy dwoma podstawami. Opatentowany system retencji próbki umożliwia pomiar próbek o wysokim stężeniu bez konieczności ich rozcieńczania. Przewód światłowodowy wbudowany w górną podstawę prowadzi do ksenonowego źródła światła. Drugi przewód wbudowany w dolną podstawę prowadzi do detektora. Gdy ramię instrumentu jest opuszczone, próbka tworzy kolumnę cieczy, zasadniczo wypełniając lukę między dwoma światłowodami.
| Widmo absorbancji Światło przechodzi przez kolumnę cieczy do detektora, który generuje widmo absorbancji w zależności od długości fali. Widmo pokazuje ilość światła pochłoniętego przez cząsteczki próbki przy każdej zmierzonej długości fali. Uwaga: Aby zapobiec parowaniu, które wpływa na dokładność pomiaru, po zakończeniu ładowania próbki lub próby pustej należy szybko zamknąć ramię instrumentu. Przykład po lewej stronie przedstawia typowe widmo absorbancji próbki kwasu nukleinowego. Widmo jest mierzone w zakresie od 190 nm do 850 nm. Wyświetlany zakres może różnić się w zależności od użytej funkcji.
| Absorbancja próbki Gdy instrument bada pustą próbkę, widmo referencyjne jest pobierane z roztworu do próby pustej i zapisywane w pamięci. Dla każdego pomiaru próbki, jej intensywność wraz z intensywnością próby pustej są wykorzystywane do obliczenia całkowitej absorbancji próbki zgodnie z równaniem po lewej stronie.
Równanie Lamberta-Beera gdzie: A = absorbancja w jednostkach absorbancji (A) e = molowy współczynnik absorpcji zależny od długości fali (lub współczynnik ekstynkcji) w litrach/mol-cm b = długość ścieżki w cm c = stężenie analitu w molach/litr lub molarność (M) | Stężenie próbki Równanie Lamberta-Beera (prawo Beera) pokazane po lewej stronie służy do korelacji absorbancji próbki z jej stężeniem. Długość ścieżki to odległość pomiędzy dwoma podstawami, która zmienia się w czasie rzeczywistym podczas każdego pomiaru. Ta technika automatycznej zmiany długości ścieżki zapewnia dokładne wyniki stężenia w szerokim zakresie dynamicznym.
| Baseline correction (Korekta sygnału bazowego) W przypadku niektórych zastosowań instrument można skonfigurować tak, aby stosował korektę sygnału bazowego do każdego pomiaru w celu zminimalizowania wszelkich przesunięć spowodowanych rozpraszaniem światła przez cząstki stałe w widmach próbek. Korekta odejmuje wartość absorbancji przy referencyjnej długości fali, która jest bliska zeru, od wartości absorbancji przy każdej długości fali w całym widmie, zasadniczo „przywiązując” widmo do zerowych jednostek absorbancji przy referencyjnej długości fali.
| Względna fluorescencja próbki Czerwona lub niebieska dioda LED jest używana jako źródło światła. Światło przechodzi przez filtr wzbudzenia, przez kolumnę cieczy do detektora, który rejestruje natężenie sygnału fluorescencji. Ta wartość jest następnie przeliczana na względne jednostki fluorescencji.
| Stężenie próbki fluorescencyjnej Algorytm dopasowywania krzywej, który wymaga co najmniej dwóch wzorców, jest używany do obliczania danych stężenia. Testy fluorescencyjne NanoDrop Ultra dsDNA BR i RNA BR wykorzystują zmodyfikowany wykres Hilla.