Pomiar fluorescencji dsDNA lub RNA

Funkcji fluorescencji dsDNA i RNA należy używać w połączeniu z testami NanoDrop Ultra Fluorescence Assays do ilościowego oznaczania próbek dsDNA lub RNA. Funkcje te informują o stężeniu kwasu nukleinowego. Testy fluorescencyjne szerokiego zakresu NanoDrop Ultra dsDNA Broad Range (BR) i RNA Broad Range (BR) zawierają selektywne barwniki, które fluoryzują tylko po związaniu z cząsteczką docelową.

Przed rozpoczęciem pracy...

Przed rozpoczęciem pomiarów za pomocą instrumentu NanoDrop Ultra należy podnieść ramię i wyczyścić górną i dolną podstawę. Należy przynajmniej przetrzeć podstawy nową ściereczką laboratoryjną. Więcej informacji znajduje się w punkcie Czyszczenie podstaw. Więcej informacji na temat opcji dostępnych podczas tworzenia krzywej wzorcowej można znaleźć w punkcie Praca z krzywymi wzorcowymi.

UWAGA • Nie należy spryskiwać instrumentu bezpośrednio lub używać spryskiwacza w jego pobliżu, ponieważ płyny mogą przedostać się do jego wnętrza i spowodować trwałe uszkodzenia. • Nie należy używać kwasu fluorowodorowego na podstawach. Jony fluorkowe trwale uszkadzają przewody światłowodowe wykonane z włókna kwarcowego.

Przygotowanie próbki i wzorca

Aby uzyskać instrukcje dotyczące przygotowania wzorców i próbek do testu, należy zapoznać się z instrukcjami dołączonymi do używanego testu.

Pomiar wzorców kwasów nukleinowych i próbek przy użyciu fluorescencji

1. Na ekranie głównym należy wybrać zakładkę Fluorescence (Fluorescencja) i wybrać opcję Fluorescencja dsDNA lub Fluorescencja RNA, w zależności od próbek, które mają zostać zmierzone.

2. W razie potrzeby można zmienić setup options (opcje ustawień) i wybrać Save (Zapisz).

3. Należy zmierzyć wzorce.

Uwaga Po zmierzeniu wzorców można ustawić opcję Sample to Reaction Volume (Objętość próbki do objętości reakcji) dla każdej próbki, wybierając w razie potrzeby w górnej części ekranu.

a.Odmierzyć pipetą na dolną podstawę 2 µl przygotowanej probówki testowej zawierającej wzorzec nr 1 i opuścić ramię.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona , pomiar rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest wyłączona , należy opuścić ramię i wybrać opcję Measure (Pomiar), aby go rozpocząć.

Uwaga Do każdego pomiaru należy zawsze używać nowej próbki o objętości 2 µl.

b.Po zakończeniu pomiaru należy usunąć próbkę z górnej i dolnej podstawy za pomocą suchej ściereczki laboratoryjnej.

c.Jeśli ustawienie Replicates (Powtórzenia) jest większe niż 1, należy ponowić pomiary aż do ukończenia wszystkich powtórzeń.

d.Należy powtórzyć powyższe podetapy dla wzorca nr 2, w tym dodatkowe ponowne pomiary.

e.Po zmierzeniu obu wzorców i wszystkich powtórzeń pojawi się komunikat z opcjami ponownego pomiaru wzorców lub rozpoczęcia pomiaru próbek.

f.Po zakończeniu pomiaru wzorców należy wybrać opcję Measure Samples (Pomiar próbek).

4. Pomiar próbek.

a.Należy wprowadzić lub edytować identyfikator próbki w górnej części ekranu, zaznaczając pole i wprowadzając nową nazwę próbki.

b.Odmierzyć pipetą 2 µl z probówki zawierającej odpowiednią próbkę na dolną podstawę i opuścić ramię.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest włączona , pomiar rozpocznie się automatycznie po opuszczeniu ramienia.

•Jeśli funkcja Auto-Measure (Pomiar automatyczny) jest wyłączona , należy opuścić ramię i wybrać opcję Measure (Pomiar) aby go rozpocząć.

Uwaga Do każdego pomiaru należy zawsze używać nowej próbki o objętości 2 µl.

c.Po zakończeniu pomiaru próbki, wyświetlane są raportowane wartości (patrz następny punkt).

d.Po zakończeniu pomiaru należy usunąć próbkę z górnej i dolnej podstawy za pomocą suchej ściereczki laboratoryjnej.

e.Powtórzyć podetapy, aby zmierzyć wszystkie pozostałe próbki (postępując zgodnie z instrukcjami wyświetlanymi na ekranie).

f.Po zakończeniu pomiaru próbek, wybrać opcję End Experiment (Zakończ eksperyment).

5. Podnieść ramię i wyczyścić obie podstawy nową ściereczką.