Białko Pierce 660

Mierzy całkowite stężenie białka w nieoczyszczonych próbkach przy użyciu opatentowanego odczynnika kolorymetrycznego. Pomiar białka Pierce 660 Raportowanie wyników Ustawienia Granice wykrywalności |

Teoria testu białka Pierce 660

Test białka Pierce 660 opiera się na wiązaniu opatentowanego kompleksu barwnik-metal z białkiem w warunkach środowiska kwasowego, co powoduje przesunięcie maksimum absorpcji barwnika, które jest mierzone przy 660 nm. Kompleks barwnik-metal jest czerwonawo-brązowy i zmienia kolor na zielony po związaniu białka. Zmiana koloru jest uzyskiwana przez deprotonację barwnika przy niskim pH, ułatwioną przez interakcje z dodatnio naładowanymi grupami aminokwasów w białkach. Barwnik oddziałuje głównie z resztami zasadowymi w białkach, takimi jak histydyna, arginina i lizyna oraz w mniejszym stopniu z tyrozyną, tryptofanem i fenyloalaniną. Produkt reakcji jest mierzony przy 660 nm i korygowany dla sygnału bazowego przy użyciu wartości absorbancji przy 750 nm.

Kolor wytwarzany w teście jest stabilny i wzrasta proporcjonalnie do szerokiego zakresu rosnących stężeń białka. Opcjonalnie do preparatu testowego można dodać odczynnika zwiększającego kompatybilność z detergentami jonowymi (ang. Ionic Detergent Compatibility Reagent, IDCR) w celu zwiększenia kompatybilności z dużymi ilościami detergentów jonowych, w tym buforem do próbek Laemmli SDS z błękitem bromofenolowym. Odczynnik IDCR rozpuszcza się całkowicie po dokładnym wymieszaniu i nie ma wpływu na test. Gotowe zestawy materiału wiążącego białko są dostępne u nas lub u lokalnego dystrybutora. Aby uzyskać informacje na temat IDCR, proszę skontaktować się z producentem zestawu.

Zestawy i protokoły do oznaczania białek

Aby uzyskać informacje na temat obecnie oferowanych zestawów i protokołów dla instrumentów NanoDrop Ultra, proszę zapoznać się ze stroną internetową NanoDrop. Należy postępować zgodnie z zaleceniami producenta zestawu testowego dla wszystkich wzorców i próbek (o nieznanych właściwościach). Należy upewnić się, że każda z nich jest testowana przez taki sam czas i w takiej samej temperaturze.

Wzorce białek do generowania krzywej wzorcowej mogą być również dostarczane przez producenta zestawu. Ponieważ podstawy NanoDrop Ultra mogą mierzyć wyższe stężenia białek niż tradycyjne spektrofotometry kuwetowe, konieczne może być użycie własnych wzorców białek o wyższych stężeniach niż dostarczone przez producenta. Na przykład, dodatkowe wzorce mogą być niezbędne, aby krzywa wzorcowa obejmowała odpowiedni zakres dynamiczny testu i zakres oczekiwany dla próbek o nieznanych właściwościach.

Krzywe wzorcowe białka Pierce

Do kolorymetrycznej analizy białek niezbędne jest utworzenie krzywej wzorcowej.

• Wymaga jej każdy eksperyment. Można stworzyć nową krzywą wzorcową, wybierając opcję Setup standards (Ustaw wzorce) lub zaimportować wzorzec z wcześniej przeprowadzonego eksperymentu, wybierając opcję Load standards (Wczytaj wzorce) na ekranie ustawień funkcji.

Więcej informacji można znaleźć w punkcie Praca z krzywymi wzorcowymi.