Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów białek

• Próbki białek należy odizolować i oczyścić przed pomiarem w celu usunięcia zanieczyszczeń. W zależności od próbki, zanieczyszczenia mogą obejmować DNA, RNA i niektóre składniki buforu. Więcej informacji można znaleźć w punkcie Przygotowywanie próbek.

Uwaga Odczynniki ekstrakcyjne, które zwiększają absorbancję między 200 nm a 280 nm wpływają na wyniki pomiarów, jeśli są obecne w próbkach (nawet w ilościach szczątkowych).

• Należy upewnić się, że absorbancja próbki mieści się w granicach wykrywalności instrumentu.

• Wybór próby pustej:

–W przypadku funkcji Białko A280, Białko A205 oraz Białka i etykiety, należy przeprowadzić próbę pustą z tym samym roztworem buforowym użytym do ponownego zawieszenia analitu będącego przedmiotem zainteresowania. Roztwór do próby pustej powinien mieć podobne pH i siłę jonową jak roztwór analitu.

–W przypadku funkcji Białko BCA, Białko Bradford i Białko Lowry, należy przeprowadzić próbę pustą z wodą dejonizowaną (DI H2O).

–W przypadku funkcji Białko Pierce 660 należy przeprowadzić próbę pustą z roztworem referencyjnym użytym do wygenerowania krzywej wzorcowej (roztwór referencyjny nie powinien zawierać białka wzorcowego). Więcej informacji zawiera punkt Praca z krzywymi wzorcowymi.

• Należy wykonać próbę pustą, aby ocenić wpływ absorbancji roztworu buforowego. Jeśli bufor wykazuje silną absorbancję przy lub w pobliżu długości fali analizy (zazwyczaj 280 nm lub 205 nm), konieczne może być wybranie innego buforu lub funkcji, takiej jak test kolorymetryczny (na przykład BCA lub Pierce 660). Więcej informacji można znaleźć w punkcie Wybór i pomiar próby pustej.

Uwaga Bufory takie jak Triton X, RIPA i NDSB przyczyniają się do znacznej absorbancji i nie są kompatybilne z bezpośrednimi pomiarami A280 czy A205.

• W przypadku pomiarów mikroobjętości:

–Należy upewnić się, że powierzchnie podstaw są odpowiednio oczyszczone i przygotowane. (Białka mają tendencję do przyklejania się do powierzchni podstaw).

–Należy delikatnie (ale dokładnie) wymieszać próbki przed wykonaniem pomiaru. Należy unikać wprowadzania pęcherzyków powietrza podczas mieszania i pobierania próbek.

–Należy postępować zgodnie z najlepszymi praktykami dotyczącymi pomiarów mikroobjętości.

–Należy użyć próbek o objętości 2 µl. Więcej informacji można znaleźć w punkcie Zalecane objętości próbek.

• W przypadku pomiarów z użyciem kuwet (tylko instrumenty NanoDrop UltraC i NanoDrop UltraC FL ) należy używać kompatybilnych kuwet i przestrzegać najlepszych praktyk dotyczących pomiarów prowadzonych z użyciem kuwet.

Powiązane tematy

• Najlepsze praktyki dotyczące pomiarów białek

• Pomiar próbek mikroobjętościowych

• Pomiar próbki przy użyciu kuwety

• Przygotowywanie próbek i prób pustych

• Podstawowa obsługa instrumentu