Medir la proteína A205

Utilice la aplicación Protein A205 para cuantificar péptidos purificados y otras proteínas que contienen enlaces peptídicos y exhiben absorbancia a 205 nm. Esta aplicación informa la concentración de proteína y dos valores de absorbancia (A205 y A280). También se puede utilizar una corrección inicial de un solo punto. Esta aplicación no requiere una curva estándar.

Antes de empezar...

Antes de tomar mediciones en el pedestal con el instrumento NanoDrop Ultra, levante el brazo del instrumento y limpie los pedestales superior e inferior. Como mínimo, limpie los pedestales con una toallita de laboratorio nueva. Para obtener más información, consulte Limpieza de los pedestales.

Nota Si sus muestras contienen principalmente aminoácidos como triptófano o tirosina, o enlaces disulfuro entre residuos de cisteína (cys-cys), utilice la aplicación Protein A280 en lugar de Protein A205.

AVISO • No use un atomizador o rociador sobre el instrumento o cerca de él, ya que los líquidos fluirán hacia el instrumento y podrían causar daños permanentes. • No use ácido fluorhídrico (HF) sobre los pedestales. Los iones de fluoruro causarán un daño permanente a los cables de fibra óptica de cuarzo.

Procedimiento

1. En la pantalla de inicio, seleccione la pestaña Proteins (Proteínas) y luego seleccione Protein A205.

2. Seleccione cualquiera de las opciones de configuración si lo desea y luego seleccione Save (Guardar).

3. Si usa un modelo NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, seleccione la vía de medición correcta.

–Cuando utilice una cubeta, seleccione Cuvette (Cubeta) en el menú desplegable en la parte superior de la pantalla para que se muestren los ajustes de la cubeta. Seleccione la longitud de trayectoria deseada, la velocidad de agitación y el calentamiento, y luego cierre el menú desplegable.

–Cuando utilice el pedestal para realizar mediciones, deje Pedestal como el ajuste seleccionado en la parte superior de la pantalla.

4. Pipetee 1 a 2 µl de solución de blanco en el pedestal inferior y baje el brazo, o inserte la cubeta de blanco en el soporte de cubetas.

Sugerencia: si utiliza una cubeta, asegúrese de alinear la trayectoria de luz de la cubeta con la trayectoria de luz del instrumento.

5. Seleccione Blank (Blanco) y espere a que se complete la medición.

Sugerencia: si la opción Auto-Blank (Blanco automático) está activada, la medición del blanco comienza automáticamente después de bajar el brazo. (Esta opción no está disponible para mediciones con cubetas).

6. Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita de laboratorio nueva, o retire la cubeta de blanco.

7. Pipetee 2 µl de solución de muestra en el pedestal y baje el brazo, o inserte la cubeta de muestra en el soporte de cubetas.

8. Inicie la medición de la muestra:

–Pedestal: si la opción Auto-Measure (Medición automática) está activada, baje el brazo; si está desactivada, baje el brazo y seleccione Measure (Medir).

–Cubeta: seleccione Measure (Medir).

Cuando finaliza la medición de la muestra, se muestran el espectro y los valores informados (consulte la siguiente sección).

9. Cuando haya terminado de medir las muestras, toque End Experiment (Finalizar experimento).

10. Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita nueva, o retire la cubeta de la muestra.

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