Mejores prácticas para las mediciones de proteínas

• Aísle y purifique las muestras de proteína antes de la medición para eliminar impurezas. Dependiendo de la muestra, las impurezas podrían incluir ADN, ARN y algunos componentes de solución amortiguadora. Consulte Preparación de muestras para obtener más información.

Nota Los reactivos de extracción que contribuyen a la absorbancia de entre 200 nm y 280 nm afectarán los resultados de la medición si están presentes en las muestras (incluso en cantidades residuales).

• Asegúrese de que la absorbancia de la muestra esté dentro de los límites de detección de absorbancia del instrumento.

• Elección de un blanco:

–Para la aplicación Protein A280 Pro, mida el blanco con la misma solución amortiguadora utilizada para resuspender el analito de interés. La solución de blanco debe tener un pH y una fuerza iónica similares a los de la solución del analito.

• Realice un ciclo de blanco para evaluar la contribución de absorbancia de su solución amortiguadora. Si la solución amortiguadora exhibe una fuerte absorbancia en la longitud de onda del análisis o cerca de ella (generalmente 280 nm), es posible que deba elegir una solución amortiguadora o aplicación diferentes, como un ensayo colorimétrico (por ejemplo, BCA o Pierce 660). Consulte Elección y medición de un blanco para obtener más información.

Nota Las soluciones amortiguadoras como Triton X, RIPA y NDSB aportan una absorbancia significativa y no son compatibles con las mediciones directas de A280.

• Para las mediciones de microvolumen:

–Asegúrese de que las superficies del pedestal se hayan limpiado y acondicionado correctamente. (Las proteínas tienden a adherirse a las superficies del pedestal).

–Agite suavemente (pero a fondo) las muestras antes de realizar una medición. Evite la introducción de burbujas al mezclar y pipetear.

–Siga las mejores prácticas para las mediciones de microvolumen.

–Utilice un volumen de muestra de 2 µl. Consulte Volúmenes de muestra recomendados para obtener más información.

Temas relacionados

• Mejores prácticas para las mediciones de proteínas

• Medición de una muestra de microvolumen

• Preparación de muestras y blancos

• Operaciones básicas del instrumento