Mejores prácticas para las mediciones de ácidos nucleicos

• Aísle y purifique las muestras de ácido nucleico antes de la medición para eliminar impurezas. Según la muestra, las impurezas podrían incluir ADN, ARN, nucleótidos libres, proteínas, algunos componentes amortiguadores y tintes. Consulte Preparación de muestras para obtener más información.

Nota Los reactivos de extracción, como la guanidina, el fenol y el EDTA, contribuyen a la absorbancia de entre 230 nm y 280 nm, y afectarán los resultados de la medición si están presentes en las muestras (incluso en cantidades residuales).

• Asegúrese de que la absorbancia de la muestra esté dentro de los límites de detección de absorbancia del instrumento.

• Prepare el blanco con la misma solución amortiguadora utilizada para resuspender el analito de interés. La solución de blanco debe tener un pH y una fuerza iónica similares a los de la solución del analito.

• Realice un ciclo de blanco para evaluar la contribución de absorbancia de su solución amortiguadora. Si la solución amortiguadora muestra una fuerte absorbancia en la longitud de onda del análisis o cerca de ella (normalmente 260 nm), es posible que deba elegir una solución amortiguadora diferente. Consulte Elección y medición de un blanco para obtener más información.

• Para las mediciones de microvolumen:

–Asegúrese de que las superficies del pedestal se hayan limpiado y acondicionado correctamente.

–Si es posible, caliente las muestras altamente concentradas o de moléculas grandes, como las de ADN genómico o lambda, a 63 °C (145 °F), y mezcle suavemente (pero completamente) con un mezclador de vórtice antes de realizar una medición. Evite la introducción de burbujas al mezclar y pipetear.

–Siga las mejores prácticas para las mediciones de microvolumen.

–Utilice un volumen de muestra de 1 a 2 µl. Consulte Volúmenes de muestra recomendados para obtener más información.

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