Mejores prácticas para mediciones de fluorescencia

• Para las sustancias contaminantes no analizadas y para lograr mayor precisión, los estándares deben analizarse en las mismas condiciones que las muestras experimentales.

• Aísle y purifique las muestras de ácido nucleico antes de la medición para eliminar impurezas. Según la muestra, las impurezas podrían incluir ADN, ARN, nucleótidos libres, proteínas, algunos componentes amortiguadores y tintes. Consulte Preparación de muestras para obtener más información.

• Asegúrese de que la concentración de la muestra esté dentro de los límites del ensayo seleccionado.

• Los ensayos de fluorescencia NanoDrop Ultra ofrecen un rendimiento óptimo cuando todas las soluciones están a temperatura ambiente (18 a 28 °C). Las fluctuaciones de temperatura pueden influir en la precisión de los ensayos.

• Asegúrese de que las superficies del pedestal estén correctamente limpias y acondicionadas.

• Agite en un mezclador de vórtice y centrifugue antes de tomar una medición. Evite la introducción de burbujas al mezclar y pipetear.

• Siga las mejores prácticas para las mediciones de microvolumen.

• Utilice un volumen de muestra de 2 µl. Consulte Volúmenes de muestra recomendados para obtener más información.

• Actualmente no hay datos disponibles que aborden la mutagenicidad o toxicidad de los reactivos de fluorescencia BR de ADNbc NanoDrop™ Ultra (el tinte en el componente A). Se sabe que estos reactivos se unen a los ácidos nucleicos. Trate las soluciones amortiguadoras con las mismas precauciones de seguridad que todos los demás mutágenos potenciales y deseche el tinte de acuerdo con las reglamentaciones locales.

• El ensayo de fluorescencia BR de ARN NanoDrop™ Ultra incluye un estándar de ARNr de alta calidad. Es crucial mantener la integridad y concentración de estos estándares para un rendimiento óptimo. Por lo tanto, recomendamos enfáticamente tratar los estándares de ARNr con el mismo cuidado que cualquier otro ARN. Esto incluye lo siguiente:

–Utilizar técnicas de manipulación libres de ARNasa adecuadas, como guantes, puntas de pipeta y tubos libres de ARNasa.

–Es importante mantener las tapas de los tubos cerradas siempre que sea posible.

–Evite que la pipeta toque la pared interior del tubo al extraer una muestra.

–Después de su uso, se recomienda devolver rápidamente el estándar de ARNr al refrigerador.

Temas relacionados

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• Mejores prácticas para mediciones de microvolumen

• Operaciones básicas del instrumento

Cómo trabajar con curvas estándar

Se requiere una curva estándar para el análisis de fluorescencia.

• Cada experimento requiere una curva estándar nueva.

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Nota Los ensayos de fluorescencia NanoDrop Ultra BR requieren 2 estándares.

• Mida todos los estándares antes de comenzar a analizar muestras. Después de medir la primera muestra, no se permiten cambios adicionales
en la curva estándar.

A medida que mide los estándares, aparece un cuadro de diálogo que le solicita al usuario que mida los estándares restantes.

Deslice una pantalla hacia la izquierda para ver la curva estándar a medida que la construye. Aquí hay un ejemplo:

Cuando se utiliza la aplicación del fluorómetro, un valor de R2 aparece para indicar qué tan bien se ajusta la curva estándar a los puntos de datos estándar (1,0 es un ajuste óptimo; todos los puntos se ubican exactamente sobre la curva).

Deslice una pantalla hacia la izquierda para ver la tabla de datos de los estándares. Aquí hay un ejemplo:

Mantenga presionada una fila en cualquiera de las pantallas anteriores para ver los detalles de un estándar individual. Aquí hay un ejemplo:

Después de que se hayan medido ambos estándares para el tipo de curva seleccionado, aparece un mensaje similar al siguiente:

Remeasure standards (Volver a medir los estándares): vuelve a la pantalla de medición del estándar, donde se pueden seleccionar y volver a analizar los estándares analizados anteriormente.

–En la pantalla de curva estándar o la tabla de datos de estándares, mantenga presionada la fila del estándar que se debe volver a medir para que aparezca el cuadro Sample Details (Detalles de la muestra).

–Seleccione Remeasure (Volver a medir).

Load more standards (Cargar más estándares): regresa a la pantalla de configuración, donde puede agregar estándares adicionales para medir. Se puede utilizar un total de 1 referencia y 7 estándares. Esta opción no aparecerá cuando se utilicen las aplicaciones de fluorescencia de ADNbc o fluorescencia de ARN, ya que se deben utilizar 2 estándares en esas aplicaciones.

Measure samples (Medir muestras): continúa con la pantalla de medición de muestras.

Nota Después de que se hayan medido ambos estándares, debería aparecer el mensaje “Standards Completed” (Estándares completados). Si aparece el mensaje “Invalid Standards” (Estándares no válidos) después de que se hayan medido todos los estándares, intente volver a medir los estándares utilizando el material estándar correcto.