Proteína Bradford

Mide la concentración de proteína total de muestras de proteína no purificadas utilizando un reactivo de detección colorimétrica con tinte azul de Coomassie. Medir proteína Bradford Resultados informados Ajustes Límites de detección |

Teoría del ensayo Protein Bradford

El ensayo Protein Bradford utiliza el cambio de absorbancia inducido por proteínas del tinte azul de Coomassie para determinar la concentración de proteína total. El complejo enlazado de proteína-tinte se mide a 595 nm y se corrige con respecto al valor inicial utilizando el valor de absorbancia a 750 nm. Los kits preformulados de mezcla de reactivos estabilizados que contienen tinte azul de Coomassie, alcohol y tensioactivo están disponibles a través de nosotros o de un distribuidor local.

Para maximizar la confiabilidad del ensayo Protein Bradford:

• Trabaje rápidamente y no permita que los estándares o las muestras preparados reposen más de lo necesario. Los agregados de tinte de Coomassie-tinte y tinte de Coomassie-proteína pueden formar partículas con un tiempo de desarrollo creciente, lo que da como resultado fluctuaciones significativas en las lecturas de absorbancia.

• Mida los estándares y las muestras por triplicado utilizando una nueva alícuota para cada medición. En el caso de las mediciones del pedestal, la señal total del analito (proteína-tinte) a 595 nm se limita a ~0 a 0,150 A debido a la longitud de la trayectoria de 1,0 mm del pedestal, la concentración del tinte de Coomassie y el pH ácido.

Nota Si tiene un instrumento modelo NanoDrop UltraC o NanoDrop UltraC FL, el uso de la opción de cubeta dará como resultado una señal de absorbancia más alta.

Kits y protocolos del ensayo de proteínas

Consulte el sitio web de NanoDrop para obtener kits y protocolos actualizados para los Instrumentos NanoDrop Ultra. Siga las recomendaciones del fabricante del kit de ensayo para todos los estándares y muestras (desconocidas). Asegúrese de que cada uno se someta el mismo tiempo y a la misma temperatura durante todo el ensayo.

El fabricante del kit también puede proporcionar estándares de proteínas para generar una curva estándar. Dado que los pedestales NanoDrop Ultra pueden medir concentraciones de proteínas más altas que los espectrofotómetros tradicionales basados en cubetas, es posible que deba proporcionar sus propios estándares de proteínas en concentraciones más altas que las proporcionadas por el fabricante. Por ejemplo, es posible que se requieran estándares adicionales para garantizar que la curva estándar abarque el intervalo dinámico del ensayo y el intervalo previsto de las muestras desconocidas.

Curvas estándar de Protein Bradford

Se requiere una curva estándar para el análisis colorimétrico de proteínas.

• Cada experimento requiere una curva estándar. Puede ejecutar una nueva curva estándar seleccionando la opción Setup standards (Configurar estándares) o importar el estándar de un experimento realizado previamente seleccionando Load standards (Cargar estándares) en la pantalla de configuración de la aplicación.

Para obtener más información, consulte Cómo trabajar con curvas estándar.