Proteína Pierce 660

Mide la concentración de proteína total de muestras de proteína no purificadas utilizando un reactivo de detección colorimétrica patentado. Medir la proteína Pierce 660 Resultados informados Ajustes Límites de detección |

Teoría del ensayo Protein Pierce 660

El ensayo Protein Pierce 660 se basa en la unión de un complejo de tinte-metal patentado a una proteína en condiciones ácidas que provocan un cambio en el máximo de absorción del tinte, que se mide a 660 nm. El complejo tinte-metal es de color marrón rojizo y cambia a verde al unirse a proteínas. El cambio de color se produce por la desprotonación del tinte a pH bajo, facilitada por interacciones con grupos de aminoácidos cargados positivamente en las proteínas. El tinte interactúa principalmente con residuos alcalinos en proteínas como la histidina, la arginina y la lisina y, en menor medida, con la tirosina, el triptófano y la fenilalanina. El producto de reacción se mide a 660 nm y se corrige con respecto al inicio utilizando el valor de absorbancia a 750 nm.

El color producido en el ensayo es estable y aumenta en proporción a una amplia gama de concentraciones crecientes de proteínas. Se puede agregar un reactivo de compatibilidad de detergente iónico (IDCR) opcional al reactivo del ensayo para aumentar la compatibilidad con grandes cantidades de detergentes iónicos, incluida la solución amortiguadora de muestra SDS de Laemmli con azul de bromofenol. El IDCR se disuelve completamente al mezclarlo a fondo y no tiene efecto en el ensayo. Los kits preformulados del material de unión a proteínas están disponibles a través de nosotros o de un distribuidor local. Para obtener información sobre el IDCR, consulte al fabricante del kit.

Kits y protocolos del ensayo de proteínas

Consulte el sitio web de NanoDrop para obtener kits y protocolos actualizados para los Instrumentos NanoDrop Ultra. Siga las recomendaciones del fabricante del kit de ensayo para todos los estándares y muestras (desconocidas). Asegúrese de que cada uno se someta el mismo tiempo y a la misma temperatura durante todo el ensayo.

El fabricante del kit también puede proporcionar estándares de proteínas para generar una curva estándar. Dado que los pedestales NanoDrop Ultra pueden medir concentraciones de proteínas más altas que los espectrofotómetros tradicionales basados en cubetas, es posible que deba proporcionar sus propios estándares de proteínas en concentraciones más altas que las proporcionadas por el fabricante. Por ejemplo, es posible que se requieran estándares adicionales para garantizar que la curva estándar abarque el intervalo dinámico del ensayo y el intervalo previsto de las muestras desconocidas.

Curvas estándar de proteína Pierce

Se requiere una curva estándar para el análisis colorimétrico de proteínas.

• Cada experimento requiere una curva estándar. Puede crear una nueva curva estándar seleccionando la opción Setup standards (Configurar estándares) o importar el estándar de un experimento realizado previamente seleccionando Load Standards (Cargar estándares) en la pantalla de configuración de la aplicación.

Para obtener más información, consulte Cómo trabajar con curvas estándar.