Medir proteína Lowry

El ensayo Protein Lowry utiliza el reactivo Folin-Ciocalteu como reactivo de detección colorimétrica para determinar la concentración de proteína total en muestras de proteína no purificadas. Esta aplicación es una alternativa a las otras aplicaciones colorimétricas para medir soluciones de proteínas diluidas o proteínas en presencia de componentes que exhiben una absorbancia significativa entre 200 nm y 280 nm. Esta aplicación mide la absorbancia a 650 nm y utiliza una curva estándar para calcular la concentración de proteínas. Consulte Cómo trabajar con curvas estándar para obtener más información. También se puede aplicar una corrección inicial de un solo punto.

Antes de empezar...

Antes de tomar mediciones en el pedestal con el instrumento NanoDrop Ultra, levante el brazo del instrumento y limpie los pedestales superior e inferior. Como mínimo, limpie los pedestales con una toallita de laboratorio nueva. Para obtener más información, consulte Limpieza de los pedestales.

AVISO • No use un atomizador o rociador sobre el instrumento o cerca de él, ya que los líquidos fluirán hacia el instrumento y podrían causar daños permanentes. • No use ácido fluorhídrico (HF) sobre los pedestales. Los iones de fluoruro causarán un daño permanente a los cables de fibra óptica de cuarzo.

Procedimiento

1. En la pantalla de inicio, seleccione la pestaña Proteins (Proteínas) y luego seleccione Protein Lowry (Proteína Lowry).

2. Seleccione cualquiera de las opciones de configuración si lo desea y luego seleccione Save (Guardar).

Sugerencia: para este ensayo, recomendamos establecer Curve Type (Tipo de curva) en “2nd Order Polynomial” (Polinomio de segundo orden).

3. Si usa un modelo NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, seleccione la vía de medición correcta.

–Cuando utilice una cubeta, seleccione Cuvette (Cubeta) en el menú desplegable en la parte superior de la pantalla para que se muestren los ajustes de la cubeta. Seleccione la longitud de trayectoria deseada, la velocidad de agitación y el calentamiento, y luego cierre el menú desplegable.

–Cuando utilice el pedestal para realizar mediciones, deje Pedestal como el ajuste seleccionado en la parte superior de la pantalla.

4. Mida el blanco:

–Pipetee 2 µl de H2O DI en el pedestal inferior y baje el brazo, o inserte la cubeta de blanco de H2O DI en el soporte de cubetas.

Sugerencia: si utiliza una cubeta, asegúrese de alinear la trayectoria de la luz de la cubeta con la trayectoria de la luz del instrumento.

–Seleccione Blank (Blanco) y espere a que se complete la medición.

Sugerencia: si la opción Auto-Measure (Medición automática) está activada, la medición del estándar comienza automáticamente después de bajar el brazo. (Esta opción no está disponible para mediciones con cubetas).

–Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita de laboratorio nueva, o retire la cubeta de blanco.

5. Medir el estándar de referencia:

–Pipetee 2 µl de solución de referencia en el pedestal o inserte la cubeta de referencia (la solución de referencia no debe contener nada de la solución madre de proteína estándar, consulte Cómo trabajar con curvas estándar para obtener más detalles).

–Seleccione Measure (Medir) y espere a que se complete la medición.

–Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita nueva, o retire la cubeta.

–Si el ajuste de réplicas es mayor que 1, repita la medición.

6. Medir los estándares restantes:

–Pipetee 2 µl del estándar 1 en el pedestal o inserte la cubeta del estándar 1.

–Seleccione Measure (Medir) y espere a que se complete la medición.

–Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita nueva, o retire la cubeta.

–Si el ajuste de réplicas es mayor que 1, repita la medición.

–Repita los subpasos anteriores para cada estándar adicional (cuando se haya medido una cantidad específica de estándares y réplicas, un mensaje le preguntará si desea volver a medir los estándares, cargar más estándares o comenzar a medir muestras).

–Si terminó de medir los estándares, seleccione Medir muestras. (deslice el dedo hacia la izquierda para ver la curva estándar) cuando utilice el software de control local o seleccione la pestaña Curve (Curva) cuando utilice el software de control de PC.

7. Medir las muestras:

–Pipetee 2 µl de la muestra 1 en el pedestal o inserte la cubeta de la muestra 1.

–Seleccione Measure Samples (Medir muestras) y espere a que se complete la medición.

–Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita nueva, o retire la cubeta.

–Si el ajuste de réplicas es mayor que 1, repita la medición.

8. Cuando haya terminado de medir las muestras, seleccione End Experiment (Finalizar experimento).

9. Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita nueva, o retire la cubeta de la muestra.

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