Mejores prácticas para las mediciones de proteínas

• Aísle y purifique las muestras de proteína antes de la medición para eliminar impurezas. Dependiendo de la muestra, las impurezas podrían incluir ADN, ARN y algunos componentes de solución amortiguadora. Consulte Preparación de muestras para obtener más información.

Nota Los reactivos de extracción que contribuyen a la absorbancia de entre 200 nm y 280 nm afectarán los resultados de la medición si están presentes en las muestras (incluso en cantidades residuales).

• Asegúrese de que la absorbancia de la muestra esté dentro de los límites de detección de absorbancia del instrumento.

• Elección de un blanco:

–Para las aplicaciones Protein A280, Protein A205 y Proteins & Labels, mida el blanco con la misma solución amortiguadora utilizada para resuspender el analito de interés. La solución de blanco debe tener un pH y una fuerza iónica similares a los de la solución del analito.

–Para las aplicaciones Protein BCA, Protein Bradford, and Protein Lowry, utilice el blanco con agua desionizada (H2O DI).

–Para la aplicación Protein Pierce 660, mida el blanco con la solución de referencia utilizada para crear la curva estándar (la solución de referencia no debe contener ninguna de las soluciones madre de proteína estándar). Para obtener más información, consulte Cómo trabajar con curvas estándar.

• Realice un ciclo de blanco para evaluar la contribución de absorbancia de su solución amortiguadora. Si la solución amortiguadora exhibe una fuerte absorbancia en la longitud de onda del análisis o cerca de ella (generalmente 280 nm o 205 nm), es posible que deba elegir un tampón o una aplicación diferente, como un ensayo colorimétrico (por ejemplo, BCA o Pierce 660). Consulte Elección y medición de un blanco para obtener más información.

Nota Las soluciones amortiguadoras como Triton X, RIPA y NDSB aportan una absorbancia significativa y no son compatibles con las mediciones directas de A280 o A205.

• Para las mediciones de microvolumen:

–Asegúrese de que las superficies del pedestal se hayan limpiado y acondicionado correctamente. (Las proteínas tienden a adherirse a las superficies del pedestal).

–Agite suavemente (pero a fondo) las muestras antes de realizar una medición. Evite la introducción de burbujas al mezclar y pipetear.

–Siga las mejores prácticas para las mediciones de microvolumen.

–Utilice un volumen de muestra de 2 µl. Consulte Volúmenes de muestra recomendados para obtener más información.

• Para las mediciones con cubetas (solo para instrumentos NanoDrop UltraC y NanoDrop UltraC FL), utilice cubetas compatibles y siga las mejores prácticas para las mediciones con cubetas.

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