Medición de la fluorescencia de ADNbc o fluorescencia de ARN

Utilice las aplicaciones dsDNA Fluorescence y RNA Fluorescence junto con los ensayos de fluorescencia NanoDrop Ultra para cuantificar muestras de ADNbc o ARN. Estas aplicaciones informan la concentración de ácido nucleico. Los ensayos de fluorescencia NanoDrop Ultra de ADNbc de amplio rango (BR) y ARN de amplio rango (BR) contienen tintes selectivos que emiten fluorescencia solo cuando se unen a la molécula objetivo.

Antes de empezar...

Antes de tomar mediciones en el pedestal con el instrumento NanoDrop Ultra, levante el brazo del instrumento y limpie los pedestales superior e inferior. Como mínimo, limpie los pedestales con una toallita de laboratorio nueva. Para obtener más información, consulte Limpieza de los pedestales. Consulte Cómo trabajar con curvas estándar para obtener más información sobre las opciones disponibles al crear una curva estándar.

AVISO • No use un atomizador o rociador sobre el instrumento o cerca de él, ya que los líquidos fluirán hacia el instrumento y podrían causar daños permanentes. • No use ácido fluorhídrico (HF) sobre los pedestales. Los iones de fluoruro causarán un daño permanente a los cables de fibra óptica de cuarzo.

Preparación de muestras y estándares

Para obtener instrucciones sobre la preparación de los estándares y las muestras del ensayo, consulte las instrucciones que acompañan el ensayo que está utilizando.

Medición de estándares y muestras de ácidos nucleicos mediante fluorescencia

1. En la pantalla de inicio, seleccione la pestaña Fluorescence (Fluorescencia) y seleccione dsDNA Fluorescence (Fluorescencia de ADNbc) o RNA Fluorescence (Fluorescencia de ARN), según las muestras que medirá.

2. Seleccione cualquiera de las opciones de configuración si lo desea y luego seleccione Save (Guardar).

3. Mida los estándares.

Nota Después de medir los estándares, la opción Sample to Reaction Volume (Volumen de muestra sobre reacción) se puede cambiar para cada muestra al seleccionar en la parte superior de la pantalla, si lo desea.

a.Pipetee 2 µl del tubo de ensayo preparado que contiene el estándar n.º 1 en el pedestal inferior y baje el brazo.

•Si la opción Auto-Measure (Medición automática) está activada , la medición comenzará automáticamente después de bajar el brazo.

•Si la opción Auto-Measure (Medición automática) está desactivada , baje el brazo y seleccione Measure (Medir) para comenzar la medición.

Nota Utilice siempre una alícuota nueva de 2 µl para cada medición.

b.Una vez completada la medición, retire la muestra tanto del pedestal superior como del pedestal inferior usando una toallita de laboratorio seca.

c.Si la configuración de réplicas es mayor que 1, repita la medición hasta que se completen todas las réplicas.

d.Repita los subpasos anteriores para el estándar n.º 2, incluidas las mediciones de réplicas adicionales.

e.Cuando se hayan medido tanto los estándares como todas las réplicas, aparecerá un mensaje con opciones para volver a medir los estándares o comenzar a medir muestras.

f.Si terminó de medir los estándares, seleccione Measure Samples (Medir muestras).

4. Mida las muestras.

a.Ingrese o edite el ID de la muestra en la parte superior de la pantalla al marcar la casilla e ingresar un nuevo nombre de muestra.

b.Pipetee 2 µl del tubo de ensayo que contiene la muestra correspondiente en el pedestal inferior y baje el brazo.

•Si la opción Auto-Measure (Medición automática) está activada , la medición comenzará automáticamente después de bajar el brazo.

•Si Auto-Measure (Medición automática) está desactivada , baje el brazo y seleccione Measure (Medir) para comenzar la medición.

Nota Utilice siempre una alícuota nueva de 2 µl para cada medición.

c.Cuando finaliza la medición de la muestra, se muestran los valores informados (consulte la siguiente sección).

d.Una vez completada la medición, retire la muestra del pedestal superior e inferior usando una toallita de laboratorio seca.

e.Repita los subpasos para medir todas las muestras restantes (siguiendo las indicaciones en pantalla).

f.Cuando haya terminado de medir las muestras, seleccione End Experiment (Finalizar experimento).

5. Levante el brazo y limpie ambos pedestales con una toallita nueva.