Cálculos

Al igual que con las otras aplicaciones de proteínas, Proteins A205 utiliza la ecuación Beer-Lambert para correlacionar la absorbancia con la concentración en función del coeficiente de extinción y la longitud de la trayectoria de la muestra. Esta aplicación ofrece tres opciones (que se muestran a la derecha) para seleccionar un coeficiente de extinción apropiado para cada muestra medida, que se utilizará junto con la ley de Beer para calcular la concentración de la muestra. Si se conoce el coeficiente de extinción de la muestra, elija la opción e 1 % (masa) e ingrese el valor. De lo contrario, calcule el coeficiente de extinción o elija la opción que mejor se adapte a la solución de muestra. Sugerencia: idealmente, el coeficiente de extinción debe determinarse empíricamente utilizando una solución de la proteína del estudio con una concentración conocida utilizando la misma solución amortiguadora. |  | Opciones disponibles para el coeficiente de extinción • 31, supone e0,1 % (1 mg/ml) a 205 nm = 31 • Alcances, supone e0,1 % (1 mg/ml) a 205 nm = 27 + 120 * (A280/A205) • Otra proteína, ingrese el coeficiente de extinción de masa en l/g-cm para una solución de proteína de 1 mg/ml (e0,1 %) Nota: consulte Tipo de muestra para obtener más información. Valores medidos Absorbancia de A205 Nota: en el caso de las mediciones de absorbancia de microvolumen y las mediciones tomadas con cubetas no estándar (que no sean de 10 nm), los espectros se normalizan a un equivalente de 10 mm de longitud de trayectoria. • Los valores de absorbancia de proteína se miden a 205 nm utilizando el espectro normalizado. Si no se selecciona la corrección inicial, este es el valor de A205 informado y el valor utilizado para calcular la concentración de proteínas. • Si la opción Baseline Correction (Corrección inicial) está seleccionada, se informa el valor normalizado y el valor de absorbancia corregido al inicio a 205 nm, y se utilizan para calcular la concentración de proteína. Absorbancia A280 • También se informa el valor de absorbancia normalizado y corregido al inicio (si se selecciona) a 280 nm.
Las concentraciones de proteína calculadas se basan en el valor de absorbancia a 205 nm, el coeficiente de extinción seleccionado (o ingresado) y la longitud de la trayectoria de la muestra. También se puede aplicar una corrección inicial de un solo punto. La concentración se informa en unidades de masa. Hay calculadoras disponibles en Internet para convertir la concentración de unidades de masa a molares, según la secuencia de la muestra. |
|  | Longitud de la trayectoria de la muestra • Para las mediciones de microvolumen, el software selecciona la longitud de trayectoria óptima (entre 1,0 mm y 0,03 mm) en función de la absorbancia de la muestra en la longitud de onda de análisis. • Para las mediciones con cubetas, se utiliza la longitud de trayectoria después de cambiar al modo de cubetas (consulte Ajustes de cubeta). • Los espectros y los valores de absorbancia mostrados se normalizan a un equivalente de 10 mm de longitud de trayectoria.
|  | Valores informados • Concentración de proteínas. Informado en la unidad seleccionada (mg/ml o µg/ml). Los cálculos se basan en la ecuación de Beer-Lambert utilizando el valor de absorbancia de proteínas corregido. • Método. Determina el coeficiente de extinción utilizado junto con la ley de Beer para calcular la concentración de la muestra. • Corrección inicial. Longitud de onda seleccionada para la corrección inicial y la absorbancia detectada en esa longitud de onda. • Ubicación. Muestra si la medición se tomó del modo pedestal o cubeta. • Longitud de onda monitoreada. Ingrese una longitud de onda adicional cuyo valor de absorbancia desee incluir en el informe. • Coeficiente de extinción de masa (solución al 1 %).
|  | • Agitador. Se mostrará “Off” (desactivado) cuando no se use la función del agitador en un modelo de cubeta. Cuando se utiliza la función de agitador, se muestra la velocidad de agitación. • Calentador. Se mostrará “Off” u “On” para indicar si el puerto de la cubeta se calentó durante la medición. • Temperatura medida. Se mostrará la temperatura del puerto de la cubeta durante la medición. • Temperatura objetivo. Se mostrará la temperatura deseada del puerto de la cubeta.